噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选
서균체전시중조인림파독소돌변체고급수체친화사선
Phage Display of Recombinant Human Lymphotoxin Mutation Libraries and Receptor Affinity Screening
  • 万方数据
    生物化学与生物物理进展 생물화학여생물물리진전
    PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
    2005年 1期 75-80 ,共6页

    沈毅珺%潘卫%许燕%王征%杨彤%谭靖伟%吴劲松%吴芳%曹峰%刘彦君

    침의군%반위%허연%왕정%양동%담정위%오경송%오방%조봉%류언군

    淋巴毒素%随机突变%噬菌体展示%亲和筛选 淋巴毒素%隨機突變%噬菌體展示%親和篩選
    림파독소%수궤돌변%서균체전시%친화사선
    淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80%的克隆与TNFR1受体特异性结合,有4个克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将这4个结合力高的突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30%,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90%.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.
    림파독소(lymphotoxin,LT)통과TNFR1수체전체조망신호,종이발휘항종류활성.대LT적수체결합구역진행다점수궤돌변,이용서균체전시중조인림파독소(rhLT)R46,S106,L130삼점수궤돌변조합문고화S106～F110구역수궤돌변체고.서균체고여고상화TNFR1수체진행친화사선,부집료능여TNFR1수체결합적rhLT돌변체.수궤도선20개단극륭서균체진행ELISA수체결합감정,기중80%적극륭여TNFR1수체특이성결합,유4개극륭여TNFR1수체적결합능력고우야생형서렬적rhLT.장저4개결합력고적돌변체극륭우pET32a(+)재체,경과대장간균표체화순화조작후,검측저사돌변체단백여TNFR1수체적결합활성화대L929세포적살상활성,발현3개극륭적수체결합성질여기전시우서균체상시기본문합,기중C199극륭여TNFR1적결합활성비야생형서렬적rhLT제고료근30%,차기대L929세포적살상활성제고료근90%.응용서균체전시기술대림파독소진행체외진화연구적상시,위하일보적단백질결구화공능연구제공료사로,가성위대분자약물개발적유효공구.
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