动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2005年
1期
55-58
,共4页
张二芹%赵心力%赵振华%孙明%陈西钊%钱爱东
張二芹%趙心力%趙振華%孫明%陳西釗%錢愛東
장이근%조심력%조진화%손명%진서쇠%전애동
禽脑脊髓炎病毒%VP0、VP3、VP1基因%原核表达%ELISA
禽腦脊髓炎病毒%VP0、VP3、VP1基因%原覈錶達%ELISA
금뇌척수염병독%VP0、VP3、VP1기인%원핵표체%ELISA
利用RT-PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因,分别插入pGEX-4T-1原核表达载体,转化到E.coli ER2566表达菌内,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表达产物.结果表明,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为53,53,56ku.以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法,用阳性血清和阴性血清进行检测.结果显示,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性,同时用美国试剂盒检测VP1活性,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样10份血清作比较,三组ELISA检测结果,其中有8份被检血清为阳性;2份被检血清为阴性.这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致.说明VP1表达蛋白活性达到预期要求,可以用做AE的ELISA诊断.
利用RT-PCR方法擴增瞭禽腦脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因,分彆插入pGEX-4T-1原覈錶達載體,轉化到E.coli ER2566錶達菌內,經IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE分析錶達產物.結果錶明,錶達的VP0、VP3、VP1融閤蛋白分子量分彆為53,53,56ku.以電洗脫法純化VP0、VP3、VP1錶達蛋白抗原併分彆建立瞭間接ELISA方法,用暘性血清和陰性血清進行檢測.結果顯示,錶達VP1蛋白反應活性相對高于VP0、VP3蛋白反應活性,最後再將自製VP1闆用自配試劑檢測其活性,同時用美國試劑盒檢測VP1活性,美國ELISA試劑盒、瓊脂擴散試驗檢測同樣10份血清作比較,三組ELISA檢測結果,其中有8份被檢血清為暘性;2份被檢血清為陰性.這一結果與瓊脂擴散試驗檢測結果一緻.說明VP1錶達蛋白活性達到預期要求,可以用做AE的ELISA診斷.
이용RT-PCR방법확증료금뇌척수염병독VP0、VP3화VP1기인,분별삽입pGEX-4T-1원핵표체재체,전화도E.coli ER2566표체균내,경IPTG유도표체후,SDS-PAGE분석표체산물.결과표명,표체적VP0、VP3、VP1융합단백분자량분별위53,53,56ku.이전세탈법순화VP0、VP3、VP1표체단백항원병분별건립료간접ELISA방법,용양성혈청화음성혈청진행검측.결과현시,표체VP1단백반응활성상대고우VP0、VP3단백반응활성,최후재장자제VP1판용자배시제검측기활성,동시용미국시제합검측VP1활성,미국ELISA시제합、경지확산시험검측동양10빈혈청작비교,삼조ELISA검측결과,기중유8빈피검혈청위양성;2빈피검혈청위음성.저일결과여경지확산시험검측결과일치.설명VP1표체단백활성체도예기요구,가이용주AE적ELISA진단.
