医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2006年
2期
107-110
,共4页
刘秀娜%潘自铁%王仙园%周娟%赵力军%胡川闽
劉秀娜%潘自鐵%王仙園%週娟%趙力軍%鬍川閩
류수나%반자철%왕선완%주연%조력군%호천민
乳腺癌%人乳腺珠蛋白%原核表达系统%蛋白纯化
乳腺癌%人乳腺珠蛋白%原覈錶達繫統%蛋白純化
유선암%인유선주단백%원핵표체계통%단백순화
目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础.方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化.结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白.结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功.
目的:剋隆人乳珠蛋白(hMAM)編碼全長cDNA,原覈錶達併純化蛋白產物,為後期研製乳腺癌早期診斷試劑盒奠定基礎.方法:自乳腺癌組織及乳腺癌細胞株MD-MB453提取總RNA,通過RT-PCR剋隆hMAMcD-NA,構建pQE40-hMAM錶達質粒,在大腸桿菌M15中錶達,利用鎳-亞硝胺乙痠組氨痠(Ni-NTA-His)親和層析法對重組蛋白進行純化.結果:乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中髮現兩種hMAM cDNA亞型,即hMAM和hMAM(Isoform),長度分彆為279和270bp,兩者相差9箇連續堿基,其翻譯產物相差3箇連續氨基痠殘基;錶達的融閤蛋白以不溶性包涵體形式存在,純化後得到純度為97%的目的蛋白.結論:穫得hMAM cDNA併髮現一箇新的hMAM突變體;融閤蛋白的錶達及純化成功.
목적:극륭인유주단백(hMAM)편마전장cDNA,원핵표체병순화단백산물,위후기연제유선암조기진단시제합전정기출.방법:자유선암조직급유선암세포주MD-MB453제취총RNA,통과RT-PCR극륭hMAMcD-NA,구건pQE40-hMAM표체질립,재대장간균M15중표체,이용얼-아초알을산조안산(Ni-NTA-His)친화층석법대중조단백진행순화.결과:유선암조직화유선암세포주중발현량충hMAM cDNA아형,즉hMAM화hMAM(Isoform),장도분별위279화270bp,량자상차9개련속감기,기번역산물상차3개련속안기산잔기;표체적융합단백이불용성포함체형식존재,순화후득도순도위97%적목적단백.결론:획득hMAM cDNA병발현일개신적hMAM돌변체;융합단백적표체급순화성공.
