中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
4期
264-266,270
,共4页
张晓丽%邹全明%章金勇%张卫军
張曉麗%鄒全明%章金勇%張衛軍
장효려%추전명%장금용%장위군
百日咳毒素%S1亚单位%突变体%原核表达
百日咳毒素%S1亞單位%突變體%原覈錶達
백일해독소%S1아단위%돌변체%원핵표체
目的 克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性.方法 采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段.将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达.表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR及重叠延伸获得了约700 bp的目的 基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27 000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应.结论 成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础.
目的 剋隆百日咳毒素S1亞單位,穫得其突變體(S1/9K-129G,rS1),構建原覈錶達繫統,併鑒定融閤蛋白的特異性.方法 採用PCR和重疊延伸擴增得到突變體,將其與pMD18-T連接,轉化至大腸桿菌DH5α,篩選得到暘性重組剋隆載體pMD18-T-rS1,經雙酶切得到rS1活性結構域編碼片段.將其插入pQE-30載體中,轉化大腸桿菌M15株,經IPTG誘導錶達.錶達產物經鎳離子柱純化,併進行SDS-PAGE和Western blot鑒定.結果 PCR及重疊延伸穫得瞭約700 bp的目的 基因片段,併穫得暘性重組錶達載體剋隆,錶達產物為相對分子質量27 000左右的蛋白,Western blot檢測能與兔抗百日咳毒素多價抗血清髮生反應.結論 成功錶達併純化瞭百日咳毒素S1亞單位突變體,為研製百日咳疫苗候補抗原的相關分子免疫學研究奠定瞭基礎.
목적 극륭백일해독소S1아단위,획득기돌변체(S1/9K-129G,rS1),구건원핵표체계통,병감정융합단백적특이성.방법 채용PCR화중첩연신확증득도돌변체,장기여pMD18-T련접,전화지대장간균DH5α,사선득도양성중조극륭재체pMD18-T-rS1,경쌍매절득도rS1활성결구역편마편단.장기삽입pQE-30재체중,전화대장간균M15주,경IPTG유도표체.표체산물경얼리자주순화,병진행SDS-PAGE화Western blot감정.결과 PCR급중첩연신획득료약700 bp적목적 기인편단,병획득양성중조표체재체극륭,표체산물위상대분자질량27 000좌우적단백,Western blot검측능여토항백일해독소다개항혈청발생반응.결론 성공표체병순화료백일해독소S1아단위돌변체,위연제백일해역묘후보항원적상관분자면역학연구전정료기출.
