CAJ | 학술논문

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用.方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定.脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况.MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况.结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体.RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达.细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白.结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据.
목적:설계병구건함유전렬선조직특이성항원(PSA)계동자적TAT-p21WAF1/CIP1융합단백진핵표체재체(pPSA-TAT-p21),사유TAT단백전도결구역(TAT)개도적억암기인단백p21WAF1/CIP1(p21)능구재전렬선암세포중실현특이성적과막전운,증강p21대전렬선암적억제작용.방법:이용PCR기술구건함유PSA계동자、TAT단백전도서렬화p21독마광가적진핵표체재체pPSA-TAT-p21,병진행매절、측서감정.지질체법재전렬선암LNCaP세포화대장암HT-29세포중전염상술표체재체급대조질립후진행반전록PCR(RT-PCR),검측p21적mRNA이급단백재불동세포중적표체정황.MTT법검측전염pPSA-TAT-p21후LNCaP세포적증식정황.결과:성공구건pPSA-TAT-p21진핵표체재체.RT-PCR화Western blotting결과현시PSA-TAT-p21재전렬선암세포중유명현표체,재대장암세포중기본불표체,정현특이성적표체,이유CMV계동자개도적p21(pCMV-21)대조조재량개세포주중균유표체.세포증식실험결과현시,함유TAT단백전도결구역적PSA-TAT-p21적융합단백대전렬선암세포증식적억제작용명현고우불함TAT적PSA-p21단백.결론:pPSA-TAT-p21능구재전렬선암세포중특이성지고효표체,위전렬선암기인적파향치료제공료실험의거.