中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
2期
248-251
,共4页
杨亮%迟戈%张俊%王良君%刘丽娜%樊淼%刘海东%李伟伟%张健飞%杨菁%隋鸿锦
楊亮%遲戈%張俊%王良君%劉麗娜%樊淼%劉海東%李偉偉%張健飛%楊菁%隋鴻錦
양량%지과%장준%왕량군%류려나%번묘%류해동%리위위%장건비%양정%수홍금
L6骨骼肌细胞%模型%α-MEM%胰岛素抵抗
L6骨骼肌細胞%模型%α-MEM%胰島素牴抗
L6골격기세포%모형%α-MEM%이도소저항
背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少.目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-05在辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室完成.材料:L6细胞株由中国协和医科大学细胞中心提供.α-MEM培养基为美国Gibco公司产品.方法:复苏后的L6细胞置于α-MEM培养基中诱导培养14 d,以考马斯亮蓝染色观察肌管出现来确定L6成肌细胞株分化完成.将分化后的细胞建立胰岛素抵抗模型,按1 × 108/孔接种于24孔板内,用含体积分数为0.02胎牛血清的α-MEM培养,以L6细胞贴满24孔板的板底为宜.换液后,向各孔内分别加入含体积分数为0.02牛血清白蛋白的α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h.设立2组,实验组的板孔内加入含1×107mol/L胰岛素的HEPES缓冲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25 mmol/L MgSO4,1.2 mmol/L CaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20 mmol/L HEPES,pH 7.4)孵育1 h;对照组的板孔内加入不含胰岛素的HEPES缓冲液孵育1 h.弃上清后用HBS缓冲液冲洗,每孔内分别加入含0.1 mol/L葡萄糖的HBS缓冲液100 μL,孵育10 min后取出置于冰板上快速回收上清.主要观察指标:考马斯亮蓝染色观察L6细胞出现肌管结构情况,葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖浓度.结果:诱导前L6细胞未见肌性结构出现,诱导分化后L6细胞内出现肌管结构.使用α-MEM无血清培养基饥饿培养1,3 h,两组上清中葡萄糖浓度基本相似(P>0.05);使用α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h后,实验组上清中葡萄糖浓度明显高于对照组(P<0.05).结论:诱导分化成肌后的L6骨骼肌细胞经α-MEM无血清培养基饥饿培养5 h,在胰岛素浓度为1×10-7mol/L的刺激下可形成胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型.
揹景:在胰島素牴抗的細胞模型中,以遊離脂肪痠誘導3T3-L1脂肪細胞和高胰島素誘導的HepG2肝癌細胞最為常見,對分佈最為廣汎靶組織骨骼肌的胰島素牴抗模型報道較少.目的:擬使用L6細胞株建立胰島素牴抗的骨骼肌細胞模型.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2007-06/2008-05在遼寧醫學院生物化學與分子生物學教研室完成.材料:L6細胞株由中國協和醫科大學細胞中心提供.α-MEM培養基為美國Gibco公司產品.方法:複囌後的L6細胞置于α-MEM培養基中誘導培養14 d,以攷馬斯亮藍染色觀察肌管齣現來確定L6成肌細胞株分化完成.將分化後的細胞建立胰島素牴抗模型,按1 × 108/孔接種于24孔闆內,用含體積分數為0.02胎牛血清的α-MEM培養,以L6細胞貼滿24孔闆的闆底為宜.換液後,嚮各孔內分彆加入含體積分數為0.02牛血清白蛋白的α-MEM無血清培養基饑餓培養5 h.設立2組,實驗組的闆孔內加入含1×107mol/L胰島素的HEPES緩遲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25 mmol/L MgSO4,1.2 mmol/L CaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20 mmol/L HEPES,pH 7.4)孵育1 h;對照組的闆孔內加入不含胰島素的HEPES緩遲液孵育1 h.棄上清後用HBS緩遲液遲洗,每孔內分彆加入含0.1 mol/L葡萄糖的HBS緩遲液100 μL,孵育10 min後取齣置于冰闆上快速迴收上清.主要觀察指標:攷馬斯亮藍染色觀察L6細胞齣現肌管結構情況,葡萄糖氧化酶法檢測上清中葡萄糖濃度.結果:誘導前L6細胞未見肌性結構齣現,誘導分化後L6細胞內齣現肌管結構.使用α-MEM無血清培養基饑餓培養1,3 h,兩組上清中葡萄糖濃度基本相似(P>0.05);使用α-MEM無血清培養基饑餓培養5 h後,實驗組上清中葡萄糖濃度明顯高于對照組(P<0.05).結論:誘導分化成肌後的L6骨骼肌細胞經α-MEM無血清培養基饑餓培養5 h,在胰島素濃度為1×10-7mol/L的刺激下可形成胰島素牴抗的骨骼肌細胞模型.
배경:재이도소저항적세포모형중,이유리지방산유도3T3-L1지방세포화고이도소유도적HepG2간암세포최위상견,대분포최위엄범파조직골격기적이도소저항모형보도교소.목적:의사용L6세포주건립이도소저항적골격기세포모형.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-06/2008-05재료녕의학원생물화학여분자생물학교연실완성.재료:L6세포주유중국협화의과대학세포중심제공.α-MEM배양기위미국Gibco공사산품.방법:복소후적L6세포치우α-MEM배양기중유도배양14 d,이고마사량람염색관찰기관출현래학정L6성기세포주분화완성.장분화후적세포건립이도소저항모형,안1 × 108/공접충우24공판내,용함체적분수위0.02태우혈청적α-MEM배양,이L6세포첩만24공판적판저위의.환액후,향각공내분별가입함체적분수위0.02우혈청백단백적α-MEM무혈청배양기기아배양5 h.설립2조,실험조적판공내가입함1×107mol/L이도소적HEPES완충액(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25 mmol/L MgSO4,1.2 mmol/L CaCl2,0.2%우혈청백단백,20 mmol/L HEPES,pH 7.4)부육1 h;대조조적판공내가입불함이도소적HEPES완충액부육1 h.기상청후용HBS완충액충세,매공내분별가입함0.1 mol/L포도당적HBS완충액100 μL,부육10 min후취출치우빙판상쾌속회수상청.주요관찰지표:고마사량람염색관찰L6세포출현기관결구정황,포도당양화매법검측상청중포도당농도.결과:유도전L6세포미견기성결구출현,유도분화후L6세포내출현기관결구.사용α-MEM무혈청배양기기아배양1,3 h,량조상청중포도당농도기본상사(P>0.05);사용α-MEM무혈청배양기기아배양5 h후,실험조상청중포도당농도명현고우대조조(P<0.05).결론:유도분화성기후적L6골격기세포경α-MEM무혈청배양기기아배양5 h,재이도소농도위1×10-7mol/L적자격하가형성이도소저항적골격기세포모형.
