江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
6期
42-46
,共5页
文蛤%异丙隆%DDRT-PCR%聚丙烯酰胺凝胶电泳%银染%克隆
文蛤%異丙隆%DDRT-PCR%聚丙烯酰胺凝膠電泳%銀染%剋隆
문합%이병륭%DDRT-PCR%취병희선알응효전영%은염%극륭
为了研究文蛤经异丙隆处理后引起的细胞基因表达变化,探索文蛤暴露于农药后分子水平上基因的开放、关闭或表达量的改变,以寻找和发现有价值的指示农药污染的生物标记物基因.在恒定温度(25℃)条件下驯化文蛤7 d,将驯化后的文蛤分为2组(每组20个),给药组文蛤暴露于添加除草剂异丙隆的海水中处理30 d,对照组文蛤暴露于天然海水中处理30 d,用酸性酚-硫酸氰胍-氯仿提取法纯化文蛤鳃总RNA,用4种锚定引物,以总RNA为模板在反转录酶的作用下合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,在锚定引物和随机引物的作用下连续进行2轮PCR反应,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,银染法显色.对聚丙烯酰胺凝胶电泳显示的差异条带进行回收,并对差异基因片段进行第2次扩增,经琼脂糖电泳后回收基因片段.结果共得到cDNA扩增片段约400条,其中有60余种基因片段的表达发生了明显的差异.在文蛤适应除草剂污染过程中有12个基因表达上调,有11个基因表达下调,有22个基因片段只在试验组表达,有23个基因片段只在对照组表达.基因差异片段可能与指示农药污染的生物标记基因的表达有关.
為瞭研究文蛤經異丙隆處理後引起的細胞基因錶達變化,探索文蛤暴露于農藥後分子水平上基因的開放、關閉或錶達量的改變,以尋找和髮現有價值的指示農藥汙染的生物標記物基因.在恆定溫度(25℃)條件下馴化文蛤7 d,將馴化後的文蛤分為2組(每組20箇),給藥組文蛤暴露于添加除草劑異丙隆的海水中處理30 d,對照組文蛤暴露于天然海水中處理30 d,用痠性酚-硫痠氰胍-氯倣提取法純化文蛤鰓總RNA,用4種錨定引物,以總RNA為模闆在反轉錄酶的作用下閤成cDNA第一鏈,以cDNA第一鏈為模闆,在錨定引物和隨機引物的作用下連續進行2輪PCR反應,用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離PCR產物,銀染法顯色.對聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示的差異條帶進行迴收,併對差異基因片段進行第2次擴增,經瓊脂糖電泳後迴收基因片段.結果共得到cDNA擴增片段約400條,其中有60餘種基因片段的錶達髮生瞭明顯的差異.在文蛤適應除草劑汙染過程中有12箇基因錶達上調,有11箇基因錶達下調,有22箇基因片段隻在試驗組錶達,有23箇基因片段隻在對照組錶達.基因差異片段可能與指示農藥汙染的生物標記基因的錶達有關.
위료연구문합경이병륭처리후인기적세포기인표체변화,탐색문합폭로우농약후분자수평상기인적개방、관폐혹표체량적개변,이심조화발현유개치적지시농약오염적생물표기물기인.재항정온도(25℃)조건하순화문합7 d,장순화후적문합분위2조(매조20개),급약조문합폭로우첨가제초제이병륭적해수중처리30 d,대조조문합폭로우천연해수중처리30 d,용산성분-류산청고-록방제취법순화문합새총RNA,용4충묘정인물,이총RNA위모판재반전록매적작용하합성cDNA제일련,이cDNA제일련위모판,재묘정인물화수궤인물적작용하련속진행2륜PCR반응,용비변성취병희선알응효전영분리PCR산물,은염법현색.대취병희선알응효전영현시적차이조대진행회수,병대차이기인편단진행제2차확증,경경지당전영후회수기인편단.결과공득도cDNA확증편단약400조,기중유60여충기인편단적표체발생료명현적차이.재문합괄응제초제오염과정중유12개기인표체상조,유11개기인표체하조,유22개기인편단지재시험조표체,유23개기인편단지재대조조표체.기인차이편단가능여지시농약오염적생물표기기인적표체유관.
