CAJ | 학술논문

目的:探讨内毒素(脂多糖,Lipoplysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞后高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)的释放和表达水平.方法:用100 ng/ml的LPS刺激RAW264.7细胞,分别于刺激后0、6、12、18、24、30、36 h和48 h,用Western blot检测细胞培养上清、细胞浆和细胞核内HMGB1蛋白的含量;用RT-PCR检测细胞中HMGB1的mRNA表达情况;用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后细胞浆和胞核内HMGB1的含量变化.分别于LPS刺激后0、1、2、4 h和6h,用酶联免疫吸附实验(Enzymelinked immunoassay,ELISA)测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含鼍.结果:LPS刺激后0～12 h细胞培养上清中无法检测到HMGB1蛋白,18 h后细胞培养上清中HMGB1蛋白的含量开始增加,于24 h达到高峰,以后稳定维持在较高水平;LPS刺激前,HMGB1主要分布于细胞核内,胞核中HMGB1蛋白含量较高,胞浆中HMGB1蛋白含量少;LPS刺激后12～48 h细胞浆中HMGB1蛋白含量逐渐增加;而LPS刺激后12～24 h细胞核内HMGB1含量逐渐减少,30 h后细胞核内HMGB1含量又逐渐增多.RT-PCR结果显示,LPS刺激后0～18 h,培养细胞中HMGB1的mRNA表达量无明显变化,24～36 h培养细胞中HMGB1的mRNA表达量明显增加.ELISA结果显示,LPS刺激后1 h,细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含量明显增高,2 h达到高峰.结论:LPS可诱导单核-巨噬细胞内HMGB1、TNF-α、IL-6表达和释放增加,LPS诱导巨噬细胞释放HMGB1的时间明显晚于TNF-α、IL-6的释放时间;LPS诱导巨噬细胞内的HMGB1从细胞核向细胞浆转位,并释放到细胞外;LPS诱导巨噬细胞HMGB1 mRNA基因表达上调的时间和蛋白合成的时间出现较晚.
목적:탐토내독소(지다당,Lipoplysaccharide,LPS)자격거서세포후고천이솔족단백B1(High mobility group protein B1,HMGB1)적석방화표체수평.방법:용100 ng/ml적LPS자격RAW264.7세포,분별우자격후0、6、12、18、24、30、36 h화48 h,용Western blot검측세포배양상청、세포장화세포핵내HMGB1단백적함량;용RT-PCR검측세포중HMGB1적mRNA표체정황;용면역세포화학、격광공취초현미경관찰LPS자격후세포장화포핵내HMGB1적함량변화.분별우LPS자격후0、1、2、4 h화6h,용매련면역흡부실험(Enzymelinked immunoassay,ELISA)측정세포배양상청중TNF-α、IL-6적함타.결과:LPS자격후0～12 h세포배양상청중무법검측도HMGB1단백,18 h후세포배양상청중HMGB1단백적함량개시증가,우24 h체도고봉,이후은정유지재교고수평;LPS자격전,HMGB1주요분포우세포핵내,포핵중HMGB1단백함량교고,포장중HMGB1단백함량소;LPS자격후12～48 h세포장중HMGB1단백함량축점증가;이LPS자격후12～24 h세포핵내HMGB1함량축점감소,30 h후세포핵내HMGB1함량우축점증다.RT-PCR결과현시,LPS자격후0～18 h,배양세포중HMGB1적mRNA표체량무명현변화,24～36 h배양세포중HMGB1적mRNA표체량명현증가.ELISA결과현시,LPS자격후1 h,세포배양상청중TNF-α、IL-6적함량명현증고,2 h체도고봉.결론:LPS가유도단핵-거서세포내HMGB1、TNF-α、IL-6표체화석방증가,LPS유도거서세포석방HMGB1적시간명현만우TNF-α、IL-6적석방시간;LPS유도거서세포내적HMGB1종세포핵향세포장전위,병석방도세포외;LPS유도거서세포HMGB1 mRNA기인표체상조적시간화단백합성적시간출현교만.