CAJ | 학술논문

目的:构建人源肝癌天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体库,为开发治疗性人源抗体奠定良好的实验基础.方法:分别收集40例人新鲜外周血各2mL(包括健康成年人和肝癌患者),进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,通过设计合适的优化引物用RT-PCR技术扩增人抗体重链可变区基因(variable region ofheavy chain,VH)、轻链可变区基因(variable region of light chain,VL)和作为间隔区的轻链恒定区基因(consistregion of light chain,CK).采用改进的重叠延伸PCR(SOE PCR)技术将VH和VL进行拼接,连接肽为Linker(Gly4Ser)3.之后引入构建核糖体展示单链抗体(scFv)库模板所需元件,包括一个T7启动子、一个核糖体结合位点(Kozak序列)和翻译起始密码,以及作为闻隔区的CK基因.模板基因片段连接T-载体转化E.coli DH5a大肠杆菌,对所构建的单链抗体库进行菌落PCR鉴定和测序分析.结果:①构建了库容量为2.65×1013的人源肝癌单链抗体库;②经菌落PCR鉴定和测序分析阳性重组子的序列,我们发现该抗体库具有丰富的多样性.结论:采用改进的重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,对构建库容量高、多样性好的人源性肝癌核糖体展示单链抗体库,提高了建库效率.成功构建的抗体库,为后续筛选抗体、抗体修饰等工作打下扎实的实验基础.
목적:구건인원간암천연고용량대、다양성호적핵당체전시단련항체고,위개발치료성인원항체전정량호적실험기출.방법:분별수집40례인신선외주혈각2mL(포괄건강성년인화간암환자),진행림파세포분리화총RNA적제취,통과설계합괄적우화인물용RT-PCR기술확증인항체중련가변구기인(variable region ofheavy chain,VH)、경련가변구기인(variable region of light chain,VL)화작위간격구적경련항정구기인(consistregion of light chain,CK).채용개진적중첩연신PCR(SOE PCR)기술장VH화VL진행병접,련접태위Linker(Gly4Ser)3.지후인입구건핵당체전시단련항체(scFv)고모판소수원건,포괄일개T7계동자、일개핵당체결합위점(Kozak서렬)화번역기시밀마,이급작위문격구적CK기인.모판기인편단련접T-재체전화E.coli DH5a대장간균,대소구건적단련항체고진행균락PCR감정화측서분석.결과:①구건료고용량위2.65×1013적인원간암단련항체고;②경균락PCR감정화측서분석양성중조자적서렬,아문발현해항체고구유봉부적다양성.결론:채용개진적중첩연신PCR(SOE-PCR)방법,대구건고용량고、다양성호적인원성간암핵당체전시단련항체고,제고료건고효솔.성공구건적항체고,위후속사선항체、항체수식등공작타하찰실적실험기출.