中国骨伤
中國骨傷
중국골상
CHINA JOURNAL OF ORTHOPAEDICS AND TRAUMATOLOGY
2011年
7期
585-588
,共4页
郭海玲%赵咏芳%王翔%徐宇%詹红生
郭海玲%趙詠芳%王翔%徐宇%詹紅生
곽해령%조영방%왕상%서우%첨홍생
淫羊藿苷%成骨细胞%骨保护素
淫羊藿苷%成骨細胞%骨保護素
음양곽감%성골세포%골보호소
目的:建立体外培养人成骨细胞系,观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖的影响,以及对人成骨细胞内骨保护素(Osteoprorotegerin,OPG)蛋白表达的影响,探讨淫羊藿苷促进人成骨细胞骨形成的可能作用机制.方法:将手术中取得的人股骨头松质骨骨片,使用酶消化法进行培养,取生长良好的第3代人成骨细胞进行实验.实验分为4组,对照组给予15%NCS-DMEM-F12(1:1)培养液培养;淫羊藿苷组分别于正常培养液内添加终浓度为10-6、10-8、10-10mol/L淫羊藿苷.噻唑蓝比色法(MTT)分别在培养1、3、5、7、9 d后观察各组人成骨细胞的增殖情况,用蛋白免疫印迹方法(in-cell western blot)测定各组培养8、10、12 d后人成骨细胞内OPG蛋白的表达情况.采用重复测量的方差分析方法,比较各组间在不同时间点的作用差异.结果:MTT结果,淫羊藿苷组具有促进人成骨细胞增殖的作用,并呈明显的量效关系,即随着淫羊藿苷浓度的增高,其促人成骨细胞增殖的能力增强,以10-6mol/L淫羊藿苷组(0.402±0.033)促成骨细胞增殖的作用最显著,与对照组(0.268±0.031)比较差异有统计学意义(P＜0.05).在时效关系的研究中,随着培养天数的延长,人成骨细胞的量逐渐增加,人成骨细胞于第5天时进入快速生长期,第7天进入平台期;淫羊藿苷组从第5天开始促进人成骨细胞的增殖,第7、9天仍然具有明显的促成骨细胞增殖的作用,以第9天促增殖作用最强.其中,第9天10-6mol/L淫羊藿苷组(0.402±0.033)与对照组(0.268±0.031)比较有统计学意义(P＜0.01).OPG表达结果,对照组人成骨细胞培养至第8天时检测到OPG蛋白的表达,表达量为1.01±0.08,第12天达到表达高峰为1.80±0.10,两个值比较有统计学差异(P＜0.05);在观察的不同天数内,不同浓度的淫羊藿苷组人成骨细胞内OPG蛋白表达低于对照组,且随着淫羊藿苷浓度的降低,OPG蛋白的表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05);干预12d,10-6mol/L淫羊藿苷组OPG量(1.67±0.13)和10-8mol/L淫羊藿苷组OPG量(1.64±0.05)比较,无统计学差异(P＞0.05).结论:淫羊藿苷促人成骨细胞骨形成能力的作用途径之一,是通过提高人成骨细胞的增殖能力而实现.
目的:建立體外培養人成骨細胞繫,觀察淫羊藿苷對人成骨細胞增殖的影響,以及對人成骨細胞內骨保護素(Osteoprorotegerin,OPG)蛋白錶達的影響,探討淫羊藿苷促進人成骨細胞骨形成的可能作用機製.方法:將手術中取得的人股骨頭鬆質骨骨片,使用酶消化法進行培養,取生長良好的第3代人成骨細胞進行實驗.實驗分為4組,對照組給予15%NCS-DMEM-F12(1:1)培養液培養;淫羊藿苷組分彆于正常培養液內添加終濃度為10-6、10-8、10-10mol/L淫羊藿苷.噻唑藍比色法(MTT)分彆在培養1、3、5、7、9 d後觀察各組人成骨細胞的增殖情況,用蛋白免疫印跡方法(in-cell western blot)測定各組培養8、10、12 d後人成骨細胞內OPG蛋白的錶達情況.採用重複測量的方差分析方法,比較各組間在不同時間點的作用差異.結果:MTT結果,淫羊藿苷組具有促進人成骨細胞增殖的作用,併呈明顯的量效關繫,即隨著淫羊藿苷濃度的增高,其促人成骨細胞增殖的能力增彊,以10-6mol/L淫羊藿苷組(0.402±0.033)促成骨細胞增殖的作用最顯著,與對照組(0.268±0.031)比較差異有統計學意義(P＜0.05).在時效關繫的研究中,隨著培養天數的延長,人成骨細胞的量逐漸增加,人成骨細胞于第5天時進入快速生長期,第7天進入平檯期;淫羊藿苷組從第5天開始促進人成骨細胞的增殖,第7、9天仍然具有明顯的促成骨細胞增殖的作用,以第9天促增殖作用最彊.其中,第9天10-6mol/L淫羊藿苷組(0.402±0.033)與對照組(0.268±0.031)比較有統計學意義(P＜0.01).OPG錶達結果,對照組人成骨細胞培養至第8天時檢測到OPG蛋白的錶達,錶達量為1.01±0.08,第12天達到錶達高峰為1.80±0.10,兩箇值比較有統計學差異(P＜0.05);在觀察的不同天數內,不同濃度的淫羊藿苷組人成骨細胞內OPG蛋白錶達低于對照組,且隨著淫羊藿苷濃度的降低,OPG蛋白的錶達量逐漸降低,差異有統計學意義(P＜0.05);榦預12d,10-6mol/L淫羊藿苷組OPG量(1.67±0.13)和10-8mol/L淫羊藿苷組OPG量(1.64±0.05)比較,無統計學差異(P＞0.05).結論:淫羊藿苷促人成骨細胞骨形成能力的作用途徑之一,是通過提高人成骨細胞的增殖能力而實現.
목적:건입체외배양인성골세포계,관찰음양곽감대인성골세포증식적영향,이급대인성골세포내골보호소(Osteoprorotegerin,OPG)단백표체적영향,탐토음양곽감촉진인성골세포골형성적가능작용궤제.방법:장수술중취득적인고골두송질골골편,사용매소화법진행배양,취생장량호적제3대인성골세포진행실험.실험분위4조,대조조급여15%NCS-DMEM-F12(1:1)배양액배양;음양곽감조분별우정상배양액내첨가종농도위10-6、10-8、10-10mol/L음양곽감.새서람비색법(MTT)분별재배양1、3、5、7、9 d후관찰각조인성골세포적증식정황,용단백면역인적방법(in-cell western blot)측정각조배양8、10、12 d후인성골세포내OPG단백적표체정황.채용중복측량적방차분석방법,비교각조간재불동시간점적작용차이.결과:MTT결과,음양곽감조구유촉진인성골세포증식적작용,병정명현적량효관계,즉수착음양곽감농도적증고,기촉인성골세포증식적능력증강,이10-6mol/L음양곽감조(0.402±0.033)촉성골세포증식적작용최현저,여대조조(0.268±0.031)비교차이유통계학의의(P＜0.05).재시효관계적연구중,수착배양천수적연장,인성골세포적량축점증가,인성골세포우제5천시진입쾌속생장기,제7천진입평태기;음양곽감조종제5천개시촉진인성골세포적증식,제7、9천잉연구유명현적촉성골세포증식적작용,이제9천촉증식작용최강.기중,제9천10-6mol/L음양곽감조(0.402±0.033)여대조조(0.268±0.031)비교유통계학의의(P＜0.01).OPG표체결과,대조조인성골세포배양지제8천시검측도OPG단백적표체,표체량위1.01±0.08,제12천체도표체고봉위1.80±0.10,량개치비교유통계학차이(P＜0.05);재관찰적불동천수내,불동농도적음양곽감조인성골세포내OPG단백표체저우대조조,차수착음양곽감농도적강저,OPG단백적표체량축점강저,차이유통계학의의(P＜0.05);간예12d,10-6mol/L음양곽감조OPG량(1.67±0.13)화10-8mol/L음양곽감조OPG량(1.64±0.05)비교,무통계학차이(P＞0.05).결론:음양곽감촉인성골세포골형성능력적작용도경지일,시통과제고인성골세포적증식능력이실현.
