西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2011年
12期
183-187
,共5页
原核表达%TEV蛋白酶%定点突变%纯化%生物活性
原覈錶達%TEV蛋白酶%定點突變%純化%生物活性
원핵표체%TEV단백매%정점돌변%순화%생물활성
利用QuikChange@Site-Directed Mutagenesis Kit将自溶性烟草蚀纹病毒蛋白酶(tobacco etch virus Protease,TEVP)219位的Ser(S)突变为Val(V),经测序验证的S219V突变质粒pMAL-TEVPS219V电转化大肠杆菌BL21 Star(DE3),并优化异丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、温度、时间对TEVP表达的影响.结果表明,突变的TEVP表达最适条件为24℃,0.75 mmol/L IPTG诱导11 h.经金属离子螯合层析纯化得到高纯度,高活性的突变TEVP蛋白酶,比活力为1 048 U/mg.每升菌液可纯化17.2 mg目标蛋白.
利用QuikChange@Site-Directed Mutagenesis Kit將自溶性煙草蝕紋病毒蛋白酶(tobacco etch virus Protease,TEVP)219位的Ser(S)突變為Val(V),經測序驗證的S219V突變質粒pMAL-TEVPS219V電轉化大腸桿菌BL21 Star(DE3),併優化異丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)誘導濃度、溫度、時間對TEVP錶達的影響.結果錶明,突變的TEVP錶達最適條件為24℃,0.75 mmol/L IPTG誘導11 h.經金屬離子螯閤層析純化得到高純度,高活性的突變TEVP蛋白酶,比活力為1 048 U/mg.每升菌液可純化17.2 mg目標蛋白.
이용QuikChange@Site-Directed Mutagenesis Kit장자용성연초식문병독단백매(tobacco etch virus Protease,TEVP)219위적Ser(S)돌변위Val(V),경측서험증적S219V돌변질립pMAL-TEVPS219V전전화대장간균BL21 Star(DE3),병우화이병기류대β-D반유당감(IPTG)유도농도、온도、시간대TEVP표체적영향.결과표명,돌변적TEVP표체최괄조건위24℃,0.75 mmol/L IPTG유도11 h.경금속리자오합층석순화득도고순도,고활성적돌변TEVP단백매,비활력위1 048 U/mg.매승균액가순화17.2 mg목표단백.
