HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定
HIV-1중국주CN54 Gag단백재필적효모중적표체순화화감정
Expression in Pichia pastoris, fermentation and purification of HIV-1 CN54 Gag antigen
  • 万方数据
    中华实验和临床病毒学杂志 중화실험화림상병독학잡지
    CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
    2005年 2期 128-131 ,共4页

    郝彦玲%马民强%傅晶晶%李海山%王贻杰%刘颖%吴岚%刘勇%邵一鸣

    학언령%마민강%부정정%리해산%왕이걸%류영%오람%류용%소일명

    HIV-1%HIV核心蛋白质P55%基因表达%毕赤酵母 HIV-1%HIV覈心蛋白質P55%基因錶達%畢赤酵母
    HIV-1%HIV핵심단백질P55%기인표체%필적효모
    目的利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺.方法PCR扩增CN54 Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1.0,电转化毕赤酵母菌株GS115,G418筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SP Sepharose FF和DEAE Separose FF柱层析,用HIV-1阳性血清和p24抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定.结果构建了高效表达CN54 Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A600值)超过300,Gag蛋白表达量达到120 mg/L.纯化后的Gag蛋白纯度高于90%,p24检测强阳性并能够与HIV-1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应.结论本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础.
    목적이용필적효모표체계통고효표체HIV-1중국주CN54적Gag단백,초보학립발효화순화공예.방법PCR확증CN54 Gag기인,삽입필적효모표체재체pPS1.0,전전화필적효모균주GS115,G418사선고표체공정균,이용5L발효관진행고밀발효,통과SP Sepharose FF화DEAE Separose FF주층석,용HIV-1양성혈청화p24항원검측시제합대순화후적Gag단백진행면역학성질적감정.결과구건료고효표체CN54 Gag단백적필적효모공정균주,발효관배양적균체밀도흡광도(A600치)초과300,Gag단백표체량체도120 mg/L.순화후적Gag단백순도고우90%,p24검측강양성병능구여HIV-1양성혈청발생특이적항원항체결합반응.결론본연구재필적효모중고효표체료HIV-1중국주CN54적Gag단백,병진행료순화화감정,위침대아국신일대HIV단백아단위역묘적연제전정료기출.
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