生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
3期
300-303
,共4页
谢俊锋%叶巧真%何建国%戴伟君%黄晓%何鸣筱%陈诚
謝俊鋒%葉巧真%何建國%戴偉君%黃曉%何鳴篠%陳誠
사준봉%협교진%하건국%대위군%황효%하명소%진성
嗜水气单胞菌%外膜蛋白OmpTS%ompTS基因%基因表达%免疫原性
嗜水氣單胞菌%外膜蛋白OmpTS%ompTS基因%基因錶達%免疫原性
기수기단포균%외막단백OmpTS%ompTS기인%기인표체%면역원성
根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增出与预期大小相符的基因片段.将此基因片段克隆至质粒pRSET A的BamHI和Eco RI位点,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达,SDS-PAGE蛋白电泳表明在39.9kD处出现超强特异带,占总蛋白的51%.以Ni-NTA-Conjugate抗体进行Western blot分析证明该39.9kD的蛋白为所表达的融合蛋白.纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体.ELISA和Western blot检测结果显示,该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的36.9 kD外膜蛋白均呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性,为此融合蛋白作为疫苗的候选成份提供理论基础.
根據嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因ompTS的覈苷痠序列設計引物,運用聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增齣與預期大小相符的基因片段.將此基因片段剋隆至質粒pRSET A的BamHI和Eco RI位點,構建重組質粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導穫得高效錶達,SDS-PAGE蛋白電泳錶明在39.9kD處齣現超彊特異帶,佔總蛋白的51%.以Ni-NTA-Conjugate抗體進行Western blot分析證明該39.9kD的蛋白為所錶達的融閤蛋白.純化融閤蛋白註射雄性新西蘭大白兔可誘導產生特異抗體.ELISA和Western blot檢測結果顯示,該抗體與錶達的融閤蛋白和從嗜水氣單胞菌中提取的36.9 kD外膜蛋白均呈暘性反應,錶明所錶達的融閤蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性,為此融閤蛋白作為疫苗的候選成份提供理論基礎.
근거기수기단포균외막단백기인ompTS적핵감산서렬설계인물,운용취합매련식반응(PCR)확증출여예기대소상부적기인편단.장차기인편단극륭지질립pRSET A적BamHI화Eco RI위점,구건중조질립,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도획득고효표체,SDS-PAGE단백전영표명재39.9kD처출현초강특이대,점총단백적51%.이Ni-NTA-Conjugate항체진행Western blot분석증명해39.9kD적단백위소표체적융합단백.순화융합단백주사웅성신서란대백토가유도산생특이항체.ELISA화Western blot검측결과현시,해항체여표체적융합단백화종기수기단포균중제취적36.9 kD외막단백균정양성반응,표명소표체적융합단백잉보지원유외막단백적면역원성,위차융합단백작위역묘적후선성빈제공이론기출.
