菌物学报
菌物學報
균물학보
MYCOSYSTEMA
2005年
3期
360-366
,共7页
赵春田%彭远义%唐国敏%王敖全%王华明
趙春田%彭遠義%唐國敏%王敖全%王華明
조춘전%팽원의%당국민%왕오전%왕화명
同源重组%外源蛋白%分泌表达
同源重組%外源蛋白%分泌錶達
동원중조%외원단백%분비표체
运用同源重组技术破坏了黑曲霉基因组中的pepD基因,该基因编码一种类subtilisin的胞外蛋白酶PEPD.实验以黑曲霉GICC2773基因组DNA为模板,PCR扩增pepD基因,并在此基因中间插入潮霉素抗性基因(hph)表达单元,由此产生了3.7kb的pepD阻断基因片段.将此阻断基因片段与载体pBS连接,构建成pepD基因阻断质粒pBSDH.采用原生质体一CaCl2/PEG法将酶切阻断质粒得到的含pepD基因和hph表达单元的3.7kb线性片段转化Aspergillus niger GICC2773菌株,在含潮霉素的平板上筛选潮霉素抗性转化子,从这些抗性转化子中经PCR检测分离到到1个pepD基因阻断突变菌株△pepD66.外源漆酶分泌活性分析显示,黑曲霉pepD基因的破坏使其外源漆酶的分泌表达有所提高.
運用同源重組技術破壞瞭黑麯黴基因組中的pepD基因,該基因編碼一種類subtilisin的胞外蛋白酶PEPD.實驗以黑麯黴GICC2773基因組DNA為模闆,PCR擴增pepD基因,併在此基因中間插入潮黴素抗性基因(hph)錶達單元,由此產生瞭3.7kb的pepD阻斷基因片段.將此阻斷基因片段與載體pBS連接,構建成pepD基因阻斷質粒pBSDH.採用原生質體一CaCl2/PEG法將酶切阻斷質粒得到的含pepD基因和hph錶達單元的3.7kb線性片段轉化Aspergillus niger GICC2773菌株,在含潮黴素的平闆上篩選潮黴素抗性轉化子,從這些抗性轉化子中經PCR檢測分離到到1箇pepD基因阻斷突變菌株△pepD66.外源漆酶分泌活性分析顯示,黑麯黴pepD基因的破壞使其外源漆酶的分泌錶達有所提高.
운용동원중조기술파배료흑곡매기인조중적pepD기인,해기인편마일충류subtilisin적포외단백매PEPD.실험이흑곡매GICC2773기인조DNA위모판,PCR확증pepD기인,병재차기인중간삽입조매소항성기인(hph)표체단원,유차산생료3.7kb적pepD조단기인편단.장차조단기인편단여재체pBS련접,구건성pepD기인조단질립pBSDH.채용원생질체일CaCl2/PEG법장매절조단질립득도적함pepD기인화hph표체단원적3.7kb선성편단전화Aspergillus niger GICC2773균주,재함조매소적평판상사선조매소항성전화자,종저사항성전화자중경PCR검측분리도도1개pepD기인조단돌변균주△pepD66.외원칠매분비활성분석현시,흑곡매pepD기인적파배사기외원칠매적분비표체유소제고.
