CAJ | 학술논문

分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22～176及r-huZP3b177～348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力.以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原,主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a22～176及huZP3b177～348抗血清;通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平;以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验(hemizona assay,HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力.结果显示:未与大分子蛋白载体耦联的r-huZP3a22～176和r-huZP3b177～348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合.由此可见,r-huZP3a22～176及r-huZP3b177～348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性.因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B-细胞表位基序.
분석대장간균표체적중조인란투명대-3(r-huZP3)단백량개태단(r-huZP3a22～176급r-huZP3b177～348)적면역원성,비교량자항혈청체외억제인정자-반투명대결합적능력.이제비성취병희선알응효전영(PAGE)순화적대장간균표체단백위항원,주동면역신서란토산생항huZP3a22～176급huZP3b177～348항혈청;통과ELISA측정비교량자적항체응답수평;이단백인적화면역조화방법측정량자항혈청동중조표체단백、천연인란ZP이급란소조직적반응성;통과경쟁성반투명대결합시험(hemizona assay,HZA)관찰량자항혈청체외억제인정자-ZP결합능력.결과현시:미여대분자단백재체우련적r-huZP3a22～176화r-huZP3b177～348항원도재면역토중산생료교고적항체적도,이차타문적항혈청가식별대장간균표체적각자중조ZP3태이급인란세포표면천연ZP,량자항혈청야도능재체외억제인정자-ZP결합.유차가견,r-huZP3a22～176급r-huZP3b177～348단백구유량호면역원성,소산생항혈청야도현시출세포화조직특이성.인차,단일혹합병량개huZP3태단균가작위항원연제검측불명원인성불잉부녀중시부존재항자신ZP항체적진단시제합,령외타문적항혈청야능용우감정이지huZP3표위태단적최소B-세포표위기서.