农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
594-599
,共6页
师永霞%徐炜%袁美妗%孙钒%庞义
師永霞%徐煒%袁美妗%孫釩%龐義
사영하%서위%원미금%손범%방의
苏云金芽孢杆菌%大肠杆菌%vip3A基因%表达%杀虫毒力
囌雲金芽孢桿菌%大腸桿菌%vip3A基因%錶達%殺蟲毒力
소운금아포간균%대장간균%vip3A기인%표체%살충독력
将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)缺失C端154个氨基酸编码区的vip3A基因(vip3T)插入原核表达载体pQE30,构建了重组表达载体pQEvip3T,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)M15进行IPTG诱导表达,比较了完整的Vip3A蛋白和C端缺失的蛋白Vip3T的可溶性和杀虫活性.与Vip3A不同,融合蛋白Vip3T以不可溶的包含体形式存在,诱导表达的菌液中没有检测到可溶性Vip3T蛋白.生物测定结果表明,M15(pOTP)诱导表达的Vip3A蛋白对初孵斜纹夜蛾(Spodopteralitua)和甜菜夜蛾(S.exigua)幼虫具有较高的杀虫活性,其提纯的包含体无毒,但包含体的碱性裂解液却又恢复了对夜蛾科害虫的活性;M15(pQEvip3T)菌液、包含体及其碱性裂解液对这两种昆虫幼虫则完全无毒,说明在大肠杆菌中,Vip3A蛋白C端氨基酸可能对Vip3A蛋白的可溶性和杀虫活性具有重要的影响.
將囌雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)缺失C耑154箇氨基痠編碼區的vip3A基因(vip3T)插入原覈錶達載體pQE30,構建瞭重組錶達載體pQEvip3T,併轉化大腸桿菌(Escherichia coli)M15進行IPTG誘導錶達,比較瞭完整的Vip3A蛋白和C耑缺失的蛋白Vip3T的可溶性和殺蟲活性.與Vip3A不同,融閤蛋白Vip3T以不可溶的包含體形式存在,誘導錶達的菌液中沒有檢測到可溶性Vip3T蛋白.生物測定結果錶明,M15(pOTP)誘導錶達的Vip3A蛋白對初孵斜紋夜蛾(Spodopteralitua)和甜菜夜蛾(S.exigua)幼蟲具有較高的殺蟲活性,其提純的包含體無毒,但包含體的堿性裂解液卻又恢複瞭對夜蛾科害蟲的活性;M15(pQEvip3T)菌液、包含體及其堿性裂解液對這兩種昆蟲幼蟲則完全無毒,說明在大腸桿菌中,Vip3A蛋白C耑氨基痠可能對Vip3A蛋白的可溶性和殺蟲活性具有重要的影響.
장소운금아포간균(Bacillus thuringiensis)결실C단154개안기산편마구적vip3A기인(vip3T)삽입원핵표체재체pQE30,구건료중조표체재체pQEvip3T,병전화대장간균(Escherichia coli)M15진행IPTG유도표체,비교료완정적Vip3A단백화C단결실적단백Vip3T적가용성화살충활성.여Vip3A불동,융합단백Vip3T이불가용적포함체형식존재,유도표체적균액중몰유검측도가용성Vip3T단백.생물측정결과표명,M15(pOTP)유도표체적Vip3A단백대초부사문야아(Spodopteralitua)화첨채야아(S.exigua)유충구유교고적살충활성,기제순적포함체무독,단포함체적감성렬해액각우회복료대야아과해충적활성;M15(pQEvip3T)균액、포함체급기감성렬해액대저량충곤충유충칙완전무독,설명재대장간균중,Vip3A단백C단안기산가능대Vip3A단백적가용성화살충활성구유중요적영향.
