CAJ | 학술논문

目的:观察特异性丝裂原细胞外信号反应激酶1(MEK1)阻断剂(PD98059)对缺氧刺激的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法:实验于2004-11/2005-11在江苏省人民医院中心实验室完成.①利用体积分数为0.95的N2和0.05的CO2混合气体建立培养的人视网膜色素上皮细胞细胞缺氧模型.②用3种不同浓度(10,50和100μmol/L)的P42/P44 MAPK特异性阻断剂PD98059处理视网膜色素上皮细胞细胞.③在缺氧24 h后用四甲基偶氮唑盐的方法检测细胞的增殖情况.④用反转录-聚合酶链反应的方法检测周期蛋白D mRNA的表达.⑤收集细胞进行流式细胞仪的检测,判断细胞的周期情况.结果:①缺氧刺激24 h后视网膜色素上皮细胞增殖,缺氧组比正常组增加4.71%.②PD98059对视网膜色素上皮细胞细胞增殖有明显的抑制作用,并具有浓度依赖性;与缺氧组相比,缺氧+10 mmol/L组、缺氧+50 mmol/L组及缺氧+100mmol/L组抑制率分别是5.11%,11.66%和16.36%.③缺氧24 h后,细胞周期蛋白D mRNA的浓度明显增加,不同浓度的PD98059对周期蛋白D的mRNA生成有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性,缺氧组与正常组比较周期蛋白D增加26.67%,与缺氧组比较,缺氧+10mmol/L组、缺氧+50mmol/L组及缺氧+100mmol/L组抑制率分别为18.93%,37.72%,57.58%.④缺氧时DNA合成前期细胞明显增多,细胞的增殖减少.结论:P42/P44MAPK信号转导通路可能通过对周期蛋白D的影响抑制缺氧时视网膜色素上皮细胞的增殖.
목적:관찰특이성사렬원세포외신호반응격매1(MEK1)조단제(PD98059)대결양자격적인시망막색소상피세포증식적영향,병초보탐토기작용궤제.방법:실험우2004-11/2005-11재강소성인민의원중심실험실완성.①이용체적분수위0.95적N2화0.05적CO2혼합기체건립배양적인시망막색소상피세포세포결양모형.②용3충불동농도(10,50화100μmol/L)적P42/P44 MAPK특이성조단제PD98059처리시망막색소상피세포세포.③재결양24 h후용사갑기우담서염적방법검측세포적증식정황.④용반전록-취합매련반응적방법검측주기단백D mRNA적표체.⑤수집세포진행류식세포의적검측,판단세포적주기정황.결과:①결양자격24 h후시망막색소상피세포증식,결양조비정상조증가4.71%.②PD98059대시망막색소상피세포세포증식유명현적억제작용,병구유농도의뢰성;여결양조상비,결양+10 mmol/L조、결양+50 mmol/L조급결양+100mmol/L조억제솔분별시5.11%,11.66%화16.36%.③결양24 h후,세포주기단백D mRNA적농도명현증가,불동농도적PD98059대주기단백D적mRNA생성유명현적억제작용,병차정농도의뢰성,결양조여정상조비교주기단백D증가26.67%,여결양조비교,결양+10mmol/L조、결양+50mmol/L조급결양+100mmol/L조억제솔분별위18.93%,37.72%,57.58%.④결양시DNA합성전기세포명현증다,세포적증식감소.결론:P42/P44MAPK신호전도통로가능통과대주기단백D적영향억제결양시시망막색소상피세포적증식.