中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2008年
1期
8-15
,共8页
王敏%彭依群%周后德%翟木绪%何玉玲%谢辉%罗湘杭%郭丽娟%廖二元
王敏%彭依群%週後德%翟木緒%何玉玲%謝輝%囉湘杭%郭麗娟%廖二元
왕민%팽의군%주후덕%적목서%하옥령%사휘%라상항%곽려연%료이원
晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病%Wnt诱导分泌蛋白3%突变体%定点突变
晚髮型脊柱骨骺髮育不良伴進行性骨關節病%Wnt誘導分泌蛋白3%突變體%定點突變
만발형척주골후발육불량반진행성골관절병%Wnt유도분비단백3%돌변체%정점돌변
目的:通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(spondyloepiphyseal dysplasia tarda with progressive arthropathy,SEDT-PA)致病型(1000T/C,840 delT)Wnt诱导分泌蛋白3(wnt-inducible secreted protein 3,WISP3)的真核表达载体,并将其表达于真核表达系统COS-7细胞系,为研究WISP3突变致SEDT-PA的机制奠定基础.方法:从正常人软骨细胞获得野生型WISP3基因的全长cDNA(WT-WISP3):用定点突变方法构建携带WISP3基因致病型的重组真核表达质粒MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)和MUT840delT/pcDNA3.1(+);以空白载体pcDNA3.1(+)为对照,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA和总蛋白;半定量RT-PCR和免疫印迹方法检测WISP3基因的表达.结果:经测序证实,构建的野生型和突变型WISP3基因的全长cDNA序列分别与文献及前期报道的SEDT-PA患者WISP3基因突变类型一致;酶切鉴定证实,成功构建了3个重组真核表达质粒[WT-WISP3/pcDNA3.1(+),MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)及MUT840delT/pcDNA3.1(+)];半定量RT-PCR和免疫印迹示,重组质粒在COS-7细胞中均高效表达.结论:成功构建了SEDT-PA致病基因WISP3的突变体并在COS-7细胞中得到表达,为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造了条件.
目的:通過構建晚髮型脊柱骨骺髮育不良伴進行性骨關節病(spondyloepiphyseal dysplasia tarda with progressive arthropathy,SEDT-PA)緻病型(1000T/C,840 delT)Wnt誘導分泌蛋白3(wnt-inducible secreted protein 3,WISP3)的真覈錶達載體,併將其錶達于真覈錶達繫統COS-7細胞繫,為研究WISP3突變緻SEDT-PA的機製奠定基礎.方法:從正常人軟骨細胞穫得野生型WISP3基因的全長cDNA(WT-WISP3):用定點突變方法構建攜帶WISP3基因緻病型的重組真覈錶達質粒MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)和MUT840delT/pcDNA3.1(+);以空白載體pcDNA3.1(+)為對照,脂質體轉染法將重組質粒瞬時轉染COS-7細胞,48 h後提取轉染細胞的總RNA和總蛋白;半定量RT-PCR和免疫印跡方法檢測WISP3基因的錶達.結果:經測序證實,構建的野生型和突變型WISP3基因的全長cDNA序列分彆與文獻及前期報道的SEDT-PA患者WISP3基因突變類型一緻;酶切鑒定證實,成功構建瞭3箇重組真覈錶達質粒[WT-WISP3/pcDNA3.1(+),MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)及MUT840delT/pcDNA3.1(+)];半定量RT-PCR和免疫印跡示,重組質粒在COS-7細胞中均高效錶達.結論:成功構建瞭SEDT-PA緻病基因WISP3的突變體併在COS-7細胞中得到錶達,為進一步探討SEDT-PA的髮病機製創造瞭條件.
목적:통과구건만발형척주골후발육불량반진행성골관절병(spondyloepiphyseal dysplasia tarda with progressive arthropathy,SEDT-PA)치병형(1000T/C,840 delT)Wnt유도분비단백3(wnt-inducible secreted protein 3,WISP3)적진핵표체재체,병장기표체우진핵표체계통COS-7세포계,위연구WISP3돌변치SEDT-PA적궤제전정기출.방법:종정상인연골세포획득야생형WISP3기인적전장cDNA(WT-WISP3):용정점돌변방법구건휴대WISP3기인치병형적중조진핵표체질립MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)화MUT840delT/pcDNA3.1(+);이공백재체pcDNA3.1(+)위대조,지질체전염법장중조질립순시전염COS-7세포,48 h후제취전염세포적총RNA화총단백;반정량RT-PCR화면역인적방법검측WISP3기인적표체.결과:경측서증실,구건적야생형화돌변형WISP3기인적전장cDNA서렬분별여문헌급전기보도적SEDT-PA환자WISP3기인돌변류형일치;매절감정증실,성공구건료3개중조진핵표체질립[WT-WISP3/pcDNA3.1(+),MUT1000T/C/pcDNA3.1(+)급MUT840delT/pcDNA3.1(+)];반정량RT-PCR화면역인적시,중조질립재COS-7세포중균고효표체.결론:성공구건료SEDT-PA치병기인WISP3적돌변체병재COS-7세포중득도표체,위진일보탐토SEDT-PA적발병궤제창조료조건.
