高校化学工程学报
高校化學工程學報
고교화학공정학보
JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING OF CHINESE UNIVERSITIES
2008年
2期
288-293
,共6页
汪前%姚忠%荀志金%徐晓滢%徐虹%韦萍
汪前%姚忠%荀誌金%徐曉瀅%徐虹%韋萍
왕전%요충%순지금%서효형%서홍%위평
γ-谷氨酰转肽酶%纯化%性质%γ-D-谷氨酰-L-色氨酸%转肽反应机制
γ-穀氨酰轉肽酶%純化%性質%γ-D-穀氨酰-L-色氨痠%轉肽反應機製
γ-곡안선전태매%순화%성질%γ-D-곡안선-L-색안산%전태반응궤제
γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能专一地催化γ-谷氨酰基的转移,在γ-谷氨酰基类衍生物的合成方面具有重要的应用价值.今利用Bacillus subtilis NX-2发酵生产GGT,上清液中的GGT经硫酸铵沉淀后,以DEAE Sepharose FF和 Source 15 Q 两步离子交换进行纯化.以γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)为目的产物,研究了GGT的基本酶学性质,确定了其最适反应温度为40 ℃,最适Ph值10.0, 供体/受体浓度为5:7,最适反应时间为4 h,产物转化率可高达42%.结合反应进程曲线,分析了GGT的作用机制,并通过实验证实了GGT不仅具有转肽活性,还可催化产物的不可逆水解,这是导致产物回收率下降的关键原因.经测定得到GGT的转肽反应米氏常数(Km)为5.08 mmol·L-1,最大反应速率(rmax)为0.034 mmol·(min·L)-1;对γ-D-Gln-L-Trp的水解反应米氏常数(Km')为2.267 mmol·L-1,最大反应速率(rmax')为0.012 mmol·(min·L)-1.
γ-穀氨酰轉肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能專一地催化γ-穀氨酰基的轉移,在γ-穀氨酰基類衍生物的閤成方麵具有重要的應用價值.今利用Bacillus subtilis NX-2髮酵生產GGT,上清液中的GGT經硫痠銨沉澱後,以DEAE Sepharose FF和 Source 15 Q 兩步離子交換進行純化.以γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)為目的產物,研究瞭GGT的基本酶學性質,確定瞭其最適反應溫度為40 ℃,最適Ph值10.0, 供體/受體濃度為5:7,最適反應時間為4 h,產物轉化率可高達42%.結閤反應進程麯線,分析瞭GGT的作用機製,併通過實驗證實瞭GGT不僅具有轉肽活性,還可催化產物的不可逆水解,這是導緻產物迴收率下降的關鍵原因.經測定得到GGT的轉肽反應米氏常數(Km)為5.08 mmol·L-1,最大反應速率(rmax)為0.034 mmol·(min·L)-1;對γ-D-Gln-L-Trp的水解反應米氏常數(Km')為2.267 mmol·L-1,最大反應速率(rmax')為0.012 mmol·(min·L)-1.
γ-곡안선전태매(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)능전일지최화γ-곡안선기적전이,재γ-곡안선기류연생물적합성방면구유중요적응용개치.금이용Bacillus subtilis NX-2발효생산GGT,상청액중적GGT경류산안침정후,이DEAE Sepharose FF화 Source 15 Q 량보리자교환진행순화.이γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)위목적산물,연구료GGT적기본매학성질,학정료기최괄반응온도위40 ℃,최괄Ph치10.0, 공체/수체농도위5:7,최괄반응시간위4 h,산물전화솔가고체42%.결합반응진정곡선,분석료GGT적작용궤제,병통과실험증실료GGT불부구유전태활성,환가최화산물적불가역수해,저시도치산물회수솔하강적관건원인.경측정득도GGT적전태반응미씨상수(Km)위5.08 mmol·L-1,최대반응속솔(rmax)위0.034 mmol·(min·L)-1;대γ-D-Gln-L-Trp적수해반응미씨상수(Km')위2.267 mmol·L-1,최대반응속솔(rmax')위0.012 mmol·(min·L)-1.
