生殖医学杂志
生殖醫學雜誌
생식의학잡지
JOURNAL OF REPRODUCTIVE MEDICINE
2010年
2期
146-151
,共6页
夏红飞%贺天柱%崔熠%马旭
夏紅飛%賀天柱%崔熠%馬旭
하홍비%하천주%최습%마욱
miR-128%真核表达载体%U343细胞%细胞增殖%基因表达
miR-128%真覈錶達載體%U343細胞%細胞增殖%基因錶達
miR-128%진핵표체재체%U343세포%세포증식%기인표체
目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.
目的 構建miR-128真覈錶達載體,研究其在神經膠質瘤細胞株U343錶達及對U343細胞增殖的影響.方法 以人神經膠質瘤細胞株U343的DNA為模闆擴增miR-128-1和miR-128-2的前體序列,將人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因剋隆到真覈錶達載體pCR3.1,將pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)錶達載體瞬時轉染U343細胞,採用Northern印跡檢測成熟的miR-128錶達.將U343細胞接種96孔闆,MTT法檢測過錶達miR-128對細胞增殖的影響.結果 p-128-1和p-128-2錶達載體經酶切及測序鑒定正確;二者轉染細胞後,反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增結果顯示,其能有效錶達miR-128的前體;Northern印跡結果均能產生成熟態的miR-128.MTT檢測結果在無血清培養和維甲痠處理的情況下,細胞的增殖能力明顯下降.結論 成功構建瞭p-128-1和p-128-2的真覈錶達載體,轉染神經膠質瘤細胞後能有效錶達,miR-128基因過錶達能抑製U343細胞的增殖.
목적 구건miR-128진핵표체재체,연구기재신경효질류세포주U343표체급대U343세포증식적영향.방법 이인신경효질류세포주U343적DNA위모판확증miR-128-1화miR-128-2적전체서렬,장인miR-128-1(has-miR128-1)화인miR-128-2(has-miR128-2)기인극륭도진핵표체재체pCR3.1,장pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)화pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)표체재체순시전염U343세포,채용Northern인적검측성숙적miR-128표체.장U343세포접충96공판,MTT법검측과표체miR-128대세포증식적영향.결과 p-128-1화p-128-2표체재체경매절급측서감정정학;이자전염세포후,반전록-취합매련반응(RT-PCR)확증결과현시,기능유효표체miR-128적전체;Northern인적결과균능산생성숙태적miR-128.MTT검측결과재무혈청배양화유갑산처리적정황하,세포적증식능력명현하강.결론 성공구건료p-128-1화p-128-2적진핵표체재체,전염신경효질류세포후능유효표체,miR-128기인과표체능억제U343세포적증식.
