军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
3期
180-183
,共4页
杜寿文%任大勇%王宇航%王婧%孙丹丹%任静强%李昌%金宁一
杜壽文%任大勇%王宇航%王婧%孫丹丹%任靜彊%李昌%金寧一
두수문%임대용%왕우항%왕청%손단단%임정강%리창%금저일
CpG ODN%CTB%HIV多表位基因%RT-PCR%细胞免疫染色
CpG ODN%CTB%HIV多錶位基因%RT-PCR%細胞免疫染色
CpG ODN%CTB%HIV다표위기인%RT-PCR%세포면역염색
目的 构建含非甲基化的CpG ODN序列及霍乱毒素B亚单位(CTB)的HIV复合多表位基因的真核表达载体,并在体外进行表达.方法 设计并合成含CpG ODN序列和linker序列的CTB基因引物,用PCR方法扩增CpG-CTB基因(CC),定向连接到真核表达载体pVL上,然后在CC基因下游插入HIV复合多表位基因MEGNp24,构建重组质粒pVL-CC-MEGNp24,酶切鉴定.纯化重组质粒,转染293T细胞,RT-PCR和细胞免疫染色方法分别检测CTB和p24基因的转录及表达,同时设质粒pVL及空白对照.结果 构建了重组质粒pVL-CC-MEGNp24,该质粒转染293T细胞后,CTB和复合多表位基因在293T细胞中得到稳定表达.结论 成功构建了含免疫佐剂的HIV复合多表位真核表达载体,为后期疫苗的研究奠定了基础.
目的 構建含非甲基化的CpG ODN序列及霍亂毒素B亞單位(CTB)的HIV複閤多錶位基因的真覈錶達載體,併在體外進行錶達.方法 設計併閤成含CpG ODN序列和linker序列的CTB基因引物,用PCR方法擴增CpG-CTB基因(CC),定嚮連接到真覈錶達載體pVL上,然後在CC基因下遊插入HIV複閤多錶位基因MEGNp24,構建重組質粒pVL-CC-MEGNp24,酶切鑒定.純化重組質粒,轉染293T細胞,RT-PCR和細胞免疫染色方法分彆檢測CTB和p24基因的轉錄及錶達,同時設質粒pVL及空白對照.結果 構建瞭重組質粒pVL-CC-MEGNp24,該質粒轉染293T細胞後,CTB和複閤多錶位基因在293T細胞中得到穩定錶達.結論 成功構建瞭含免疫佐劑的HIV複閤多錶位真覈錶達載體,為後期疫苗的研究奠定瞭基礎.
목적 구건함비갑기화적CpG ODN서렬급곽란독소B아단위(CTB)적HIV복합다표위기인적진핵표체재체,병재체외진행표체.방법 설계병합성함CpG ODN서렬화linker서렬적CTB기인인물,용PCR방법확증CpG-CTB기인(CC),정향련접도진핵표체재체pVL상,연후재CC기인하유삽입HIV복합다표위기인MEGNp24,구건중조질립pVL-CC-MEGNp24,매절감정.순화중조질립,전염293T세포,RT-PCR화세포면역염색방법분별검측CTB화p24기인적전록급표체,동시설질립pVL급공백대조.결과 구건료중조질립pVL-CC-MEGNp24,해질립전염293T세포후,CTB화복합다표위기인재293T세포중득도은정표체.결론 성공구건료함면역좌제적HIV복합다표위진핵표체재체,위후기역묘적연구전정료기출.
