实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2011年
14期
2532-2535
,共4页
逄彦华%葛凤霞%岳凤鸣%佐佐木克典
逄彥華%葛鳳霞%嶽鳳鳴%佐佐木剋典
방언화%갈봉하%악봉명%좌좌목극전
心肌梗死%胚胎干细胞%分化%心肌细胞%移植
心肌梗死%胚胎榦細胞%分化%心肌細胞%移植
심기경사%배태간세포%분화%심기세포%이식
目的:研究小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外分化为心肌细胞的培养、鉴定及胚胎干细胞移植到小鼠心肌梗死后缺血心脏的途径和剂量.方法:用电凝烧灼法制作小鼠心肌梗死模型.用悬滴法获得类胚体(embryoid body,EB),把EB分别接种在带栽玻片和无载玻片的24孔平皿中培养,用倒置相差显微镜、录像显微镜观察及用免疫荧光染色法、RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)分析法来鉴定ES细胞来源的心肌细胞.将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的GFP1品系小鼠ES细胞培养后制成悬液.浓度为2×107/mL,取不同剂量经鼠尾静脉注射到心肌梗死3 d的鼠体内,观察小鼠的反应;分别于2周和4周取出心脏,进行免疫荧光染色和HE染色.结果:在类胚体中可见自发性收缩的细胞,且类胚体在载玻片上培养有节律性收缩的细胞团个数明显增多;免疫荧光染色心肌肌钙蛋白阳性:肌球蛋白轻链(MLC)2a和MLC-2v明显表达,GFP1品系小鼠ES细胞经鼠尾静脉注射剂量为2×106个Es细胞(100μL)时鼠均能生存到2周和4周;4周后在心脏缺血区HE染色见心肌细胞结构损伤较重.肌原纤维消溶,2周后免疫荧光染色分析结果与正常对照不同,但无明显心肌肌钙蛋白表达.结论:不添加任何化学诱导剂小鼠Es细胞在体外也能分化为心肌细胞,利用倒置相差显微镜、录像显微镜观察及用免疫荧光染色、RT-PCR方法是鉴定ES细胞来源的心肌细胞的好方法.胚胎干细胞可经静脉注射移植,推荐注射剂量是2×106个ES细胞(100μL).
目的:研究小鼠胚胎榦細胞(embryonic stem cell,ES細胞)體外分化為心肌細胞的培養、鑒定及胚胎榦細胞移植到小鼠心肌梗死後缺血心髒的途徑和劑量.方法:用電凝燒灼法製作小鼠心肌梗死模型.用懸滴法穫得類胚體(embryoid body,EB),把EB分彆接種在帶栽玻片和無載玻片的24孔平皿中培養,用倒置相差顯微鏡、錄像顯微鏡觀察及用免疫熒光染色法、RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)分析法來鑒定ES細胞來源的心肌細胞.將綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)標記的GFP1品繫小鼠ES細胞培養後製成懸液.濃度為2×107/mL,取不同劑量經鼠尾靜脈註射到心肌梗死3 d的鼠體內,觀察小鼠的反應;分彆于2週和4週取齣心髒,進行免疫熒光染色和HE染色.結果:在類胚體中可見自髮性收縮的細胞,且類胚體在載玻片上培養有節律性收縮的細胞糰箇數明顯增多;免疫熒光染色心肌肌鈣蛋白暘性:肌毬蛋白輕鏈(MLC)2a和MLC-2v明顯錶達,GFP1品繫小鼠ES細胞經鼠尾靜脈註射劑量為2×106箇Es細胞(100μL)時鼠均能生存到2週和4週;4週後在心髒缺血區HE染色見心肌細胞結構損傷較重.肌原纖維消溶,2週後免疫熒光染色分析結果與正常對照不同,但無明顯心肌肌鈣蛋白錶達.結論:不添加任何化學誘導劑小鼠Es細胞在體外也能分化為心肌細胞,利用倒置相差顯微鏡、錄像顯微鏡觀察及用免疫熒光染色、RT-PCR方法是鑒定ES細胞來源的心肌細胞的好方法.胚胎榦細胞可經靜脈註射移植,推薦註射劑量是2×106箇ES細胞(100μL).
목적:연구소서배태간세포(embryonic stem cell,ES세포)체외분화위심기세포적배양、감정급배태간세포이식도소서심기경사후결혈심장적도경화제량.방법:용전응소작법제작소서심기경사모형.용현적법획득류배체(embryoid body,EB),파EB분별접충재대재파편화무재파편적24공평명중배양,용도치상차현미경、록상현미경관찰급용면역형광염색법、RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)분석법래감정ES세포래원적심기세포.장록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)표기적GFP1품계소서ES세포배양후제성현액.농도위2×107/mL,취불동제량경서미정맥주사도심기경사3 d적서체내,관찰소서적반응;분별우2주화4주취출심장,진행면역형광염색화HE염색.결과:재류배체중가견자발성수축적세포,차류배체재재파편상배양유절률성수축적세포단개수명현증다;면역형광염색심기기개단백양성:기구단백경련(MLC)2a화MLC-2v명현표체,GFP1품계소서ES세포경서미정맥주사제량위2×106개Es세포(100μL)시서균능생존도2주화4주;4주후재심장결혈구HE염색견심기세포결구손상교중.기원섬유소용,2주후면역형광염색분석결과여정상대조불동,단무명현심기기개단백표체.결론:불첨가임하화학유도제소서Es세포재체외야능분화위심기세포,이용도치상차현미경、록상현미경관찰급용면역형광염색、RT-PCR방법시감정ES세포래원적심기세포적호방법.배태간세포가경정맥주사이식,추천주사제량시2×106개ES세포(100μL).
