郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
1期
6-10
,共5页
王鹏%任鹏飞%代丽萍%王凯娟%张建营
王鵬%任鵬飛%代麗萍%王凱娟%張建營
왕붕%임붕비%대려평%왕개연%장건영
α2-HS糖蛋白%原核表达%蛋白纯化%抗原性
α2-HS糖蛋白%原覈錶達%蛋白純化%抗原性
α2-HS당단백%원핵표체%단백순화%항원성
目的:原核表达并纯化具有生物学活性的重组α2-HS糖蛋白(AHSG).方法:提取人肝癌细胞株HepG2细胞总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增出目的基因,与pMD18-T载体连接后,转化至大肠杆菌DH5α中,大量扩增后提取克隆质粒,连接至原核表达载体pEP-30a(+)中,转化BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,通过镍离子亲和层析的方法纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳、免疫印迹杂交法对纯化产物进行分析鉴定.结果:成功构建了AHSG原核表达系统BL21(pET30a-AHSG),最佳诱导条件为80 μmol/L IPTG诱导3 h;诱导表达的蛋白相对分子质量约54 600,主要以不溶性的包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白质量浓度最高达2.3 g/L,经免疫印迹杂交鉴定有抗原性.结论:成功构建了AHSG原核表达系统,该系统可高效表达重组AHSG蛋白,该蛋白具有良好的抗原性.
目的:原覈錶達併純化具有生物學活性的重組α2-HS糖蛋白(AHSG).方法:提取人肝癌細胞株HepG2細胞總RNA,逆轉錄得cDNA,PCR擴增齣目的基因,與pMD18-T載體連接後,轉化至大腸桿菌DH5α中,大量擴增後提取剋隆質粒,連接至原覈錶達載體pEP-30a(+)中,轉化BL21(DE3),經IPTG誘導蛋白錶達,通過鎳離子親和層析的方法純化重組蛋白,採用SDS-PAGE電泳、免疫印跡雜交法對純化產物進行分析鑒定.結果:成功構建瞭AHSG原覈錶達繫統BL21(pET30a-AHSG),最佳誘導條件為80 μmol/L IPTG誘導3 h;誘導錶達的蛋白相對分子質量約54 600,主要以不溶性的包涵體形式存在,純化後的重組蛋白質量濃度最高達2.3 g/L,經免疫印跡雜交鑒定有抗原性.結論:成功構建瞭AHSG原覈錶達繫統,該繫統可高效錶達重組AHSG蛋白,該蛋白具有良好的抗原性.
목적:원핵표체병순화구유생물학활성적중조α2-HS당단백(AHSG).방법:제취인간암세포주HepG2세포총RNA,역전록득cDNA,PCR확증출목적기인,여pMD18-T재체련접후,전화지대장간균DH5α중,대량확증후제취극륭질립,련접지원핵표체재체pEP-30a(+)중,전화BL21(DE3),경IPTG유도단백표체,통과얼리자친화층석적방법순화중조단백,채용SDS-PAGE전영、면역인적잡교법대순화산물진행분석감정.결과:성공구건료AHSG원핵표체계통BL21(pET30a-AHSG),최가유도조건위80 μmol/L IPTG유도3 h;유도표체적단백상대분자질량약54 600,주요이불용성적포함체형식존재,순화후적중조단백질량농도최고체2.3 g/L,경면역인적잡교감정유항원성.결론:성공구건료AHSG원핵표체계통,해계통가고효표체중조AHSG단백,해단백구유량호적항원성.
