CAJ | 학술논문

为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪脐带,取其脐静脉血管,灌注0.1％的Ⅰ型胶原酶,于37℃水浴消化10 min后收集内皮细胞,培养于含20％胎牛血清的M199培养基中,长满单层后用胰酶消化传代培养.并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及对病毒的易感性进行鉴定.结果表明,Ⅰ型胶原酶消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列；第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性,内皮细胞比率可高达100％.传3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1d,对数生长期约3d,第5d进入平台期,第7d开始脱落死亡.病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15没有区别.上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞提供了可靠的方法.
위건립일충조작간단병차능획득대량저혈관내피세포적분리배양방법,본연구채집신생건강장백저제대,취기제정맥혈관,관주0.1％적Ⅰ형효원매,우37℃수욕소화10 min후수집내피세포,배양우함20％태우혈청적M199배양기중,장만단층후용이매소화전대배양.병대배양적세포형태학、상관항원화기타특정이급대병독적역감성진행감정.결과표명,Ⅰ형효원매소화후가획득대량내피세포,세포배양후적형태학관찰현시세포첩벽생장량호,정전형적포로석상배렬；제Ⅷ인자상관항원화세포섭취을선화저밀도지단백균정양성,내피세포비솔가고체100％.전3대후적생장곡선현시세포전대후연지기소우1d,대수생장기약3d,제5d진입평태기,제7d개시탈락사망.병독감염시험표명소획득적내피세포대저온병독고도역감,병독생장여상용적PK-15몰유구별.상술연구결과표명본연구건립적혈관내피세포분리배양방법간편유효,위대량제비원대혈관내피세포제공료가고적방법.