CAJ | 학술논문

目的应用半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法(半巢式PCR-MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct). 方法分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增.将下游引物用生物素标记,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交.然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应,经过酶底物显色,通过测定吸光度来判断结果. 结果主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感,比半巢式PCR产物酶切后电泳法高10倍 ,半巢式PCR-MPH法特异性强.该法重复法好,批内CV值<10%,批间CV值<15%;该法在包被浓度为4 mg/L、产物1∶20稀释、与微孔板结合20 min后加入10 pmol/mL探针杂交30 mi n, 用1∶3 000稀释的酶显色条件下有最佳结果. 结论该法操作简便、敏感性和特异性均高 ,无放射性和EB染料污染,适于临床样本的常规检测.
목적응용반소식취합매련반응-미공판잡교법(반소식PCR-MPH)검측비뇨생식도사안의원체(Ct). 방법분별용질립화주요외막단백기인인물진행확증.장하유인물용생물소표기,경반소식PCR확증Ct주요외막단백기인후,확증산물피포피유련매친화소적미공판포획,경감변성후여표유형광소적특이성탐침진행잡교.연후통과랄근매표기적항형광소항체여잡교분자반응,경과매저물현색,통과측정흡광도래판단결과. 결과주요외막단백기인인물반소식PCR교질립인물PCR경민감,비반소식PCR산물매절후전영법고10배 ,반소식PCR-MPH법특이성강.해법중복법호,비내CV치<10%,비간CV치<15%;해법재포피농도위4 mg/L、산물1∶20희석、여미공판결합20 min후가입10 pmol/mL탐침잡교30 mi n, 용1∶3 000희석적매현색조건하유최가결과. 결론해법조작간편、민감성화특이성균고 ,무방사성화EB염료오염,괄우림상양본적상규검측.