生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
21-26
,共6页
李世崇%叶玲玲%杨海%刘红%许建%吴本传%黄培堂%陈昭烈
李世崇%葉玲玲%楊海%劉紅%許建%吳本傳%黃培堂%陳昭烈
리세숭%협령령%양해%류홍%허건%오본전%황배당%진소렬
人工转录因子%CHO细胞%EGFP%t-PA%高效表达
人工轉錄因子%CHO細胞%EGFP%t-PA%高效錶達
인공전록인자%CHO세포%EGFP%t-PA%고효표체
以酵母转录因子GAL4中1-147位氨基酸序列为构建人工转录因子的DNA结合结构域,单纯疱疹病毒转录激活子VP16中12肽(DALDDFDLDMLG)的4个串联重复作为人工转录因子的功能结构域,用SV40的核定位序列(NLS)将两部分连接起来,构建了人工转录因子GVP4并将其克隆进入表达载体pcDNA3.1/Hygro(+)中.将不同长度的人工转录因子结合序列构建在外源基因表达载体pcDNA3.1(+)启动子CMV的上游,分别连接外源基因EGFP和tPA.用表达人工转录因子和外源基因的载体共转染CHO细胞,EGFP和tPA在含不同数量人工转录因子结合位点表达载体pcDNA3.1(+)转染的CHO细胞中的表达水平呈现不同程度的提高.其中,以引入10个人工转录因子结合位点的表达载体的效果最明显,EGFP和t-PA的表达效率均提高2～3倍.结果表明,人工转录因子能有效地促进外源基因在哺乳动物细胞中的表达.
以酵母轉錄因子GAL4中1-147位氨基痠序列為構建人工轉錄因子的DNA結閤結構域,單純皰疹病毒轉錄激活子VP16中12肽(DALDDFDLDMLG)的4箇串聯重複作為人工轉錄因子的功能結構域,用SV40的覈定位序列(NLS)將兩部分連接起來,構建瞭人工轉錄因子GVP4併將其剋隆進入錶達載體pcDNA3.1/Hygro(+)中.將不同長度的人工轉錄因子結閤序列構建在外源基因錶達載體pcDNA3.1(+)啟動子CMV的上遊,分彆連接外源基因EGFP和tPA.用錶達人工轉錄因子和外源基因的載體共轉染CHO細胞,EGFP和tPA在含不同數量人工轉錄因子結閤位點錶達載體pcDNA3.1(+)轉染的CHO細胞中的錶達水平呈現不同程度的提高.其中,以引入10箇人工轉錄因子結閤位點的錶達載體的效果最明顯,EGFP和t-PA的錶達效率均提高2～3倍.結果錶明,人工轉錄因子能有效地促進外源基因在哺乳動物細胞中的錶達.
이효모전록인자GAL4중1-147위안기산서렬위구건인공전록인자적DNA결합결구역,단순포진병독전록격활자VP16중12태(DALDDFDLDMLG)적4개천련중복작위인공전록인자적공능결구역,용SV40적핵정위서렬(NLS)장량부분련접기래,구건료인공전록인자GVP4병장기극륭진입표체재체pcDNA3.1/Hygro(+)중.장불동장도적인공전록인자결합서렬구건재외원기인표체재체pcDNA3.1(+)계동자CMV적상유,분별련접외원기인EGFP화tPA.용표체인공전록인자화외원기인적재체공전염CHO세포,EGFP화tPA재함불동수량인공전록인자결합위점표체재체pcDNA3.1(+)전염적CHO세포중적표체수평정현불동정도적제고.기중,이인입10개인공전록인자결합위점적표체재체적효과최명현,EGFP화t-PA적표체효솔균제고2～3배.결과표명,인공전록인자능유효지촉진외원기인재포유동물세포중적표체.
