CAJ | 학술논문

以牛分枝杆菌vallee Ⅲ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6.将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmo1/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Westem blot分析融合蛋白的免疫活性.结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni2+亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应.
이우분지간균vallee Ⅲ주기인조DNA위모판,PCR확증mpb64、ag85b화esat6 3개목적기인편단,채용중첩연신전접기술(SOE)화기인중조기술획득융합기인mpb64-ag85b,장mpb64-ag85b화esat6천련도동일원핵표체재체pET32a(+)중획득중조질립pET64-85b-e6.장기전화도대장간균감수태세포BL21(DE3)중,이IPTG(종농도1 mmo1/L)진행유도,SDS-PAGE전영분석표체정황,이Ni2+친화층석주순화표체적융합단백화Westem blot분석융합단백적면역활성.결과표명:표체적융합단백대약위76 Ku,여예측대소상부,이Ni2+친화층석주순화적융합단백능여우결핵병양성혈청발생반응.