军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2008年
4期
319-322,361
,共5页
张浩明%付汉江%铁轶%朱捷%邢瑞云%汪成富%郑晓飞
張浩明%付漢江%鐵軼%硃捷%邢瑞雲%汪成富%鄭曉飛
장호명%부한강%철질%주첩%형서운%왕성부%정효비
微RNA%miR-195%基因表达%腺病毒科%质粒%A549
微RNA%miR-195%基因錶達%腺病毒科%質粒%A549
미RNA%miR-195%기인표체%선병독과%질립%A549
目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195.
目的:利用AdEasy繫統構建miR-195的腺病毒錶達載體,為研究miR-195的功能提供條件.方法:將miRNA-195前體序列從已構建的pcDNA-miR-195載體中剋隆進穿梭載體pAdTrack-CMV,通過與骨架載體pAdEasy-1在大腸桿菌BJ5183中高效同源重組,穫得完整的重組腺病毒質粒.利用HEK293細胞包裝併擴增重組腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌細胞A549後,利用miRNA的定量RT-PCR技術檢測Ad-195在細胞中錶達miR-195情況.隨後熒光素酶報告基因實驗證明,Ad-195錶達的miR-195能夠作用于BCL2基因上預測的miR-195靶位點.結果:實時定量PCR檢測顯示,Ad-195感染肺癌細胞A549後,miR-195錶達水平有顯著的上調.結論:miR-195的腺病毒錶達載體構建成功,能夠用于在細胞內過錶達具有生物學功能的miR-195.
목적:이용AdEasy계통구건miR-195적선병독표체재체,위연구miR-195적공능제공조건.방법:장miRNA-195전체서렬종이구건적pcDNA-miR-195재체중극륭진천사재체pAdTrack-CMV,통과여골가재체pAdEasy-1재대장간균BJ5183중고효동원중조,획득완정적중조선병독질립.이용HEK293세포포장병확증중조선병독Ad-195.Ad-195감염폐암세포A549후,이용miRNA적정량RT-PCR기술검측Ad-195재세포중표체miR-195정황.수후형광소매보고기인실험증명,Ad-195표체적miR-195능구작용우BCL2기인상예측적miR-195파위점.결과:실시정량PCR검측현시,Ad-195감염폐암세포A549후,miR-195표체수평유현저적상조.결론:miR-195적선병독표체재체구건성공,능구용우재세포내과표체구유생물학공능적miR-195.
