南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
5期
761-766
,共6页
田平阁%周春平%张超%杨慧%吴小金%陆滟霞%刘国炳%李学农
田平閣%週春平%張超%楊慧%吳小金%陸滟霞%劉國炳%李學農
전평각%주춘평%장초%양혜%오소금%륙염하%류국병%리학농
肿瘤干细胞%CD133%噬菌体展示%肽库
腫瘤榦細胞%CD133%噬菌體展示%肽庫
종류간세포%CD133%서균체전시%태고
目的 筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定.方法 首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽.应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆.提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列.通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况.结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍.经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义.经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强.结论 成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行.
目的 篩選可與人腫瘤榦細胞錶麵標記物CD133特異性結閤的短肽併進行初步鑒定.方法 首先閤成人腫瘤榦細胞錶麵標記物CD133細胞外片段的生物素化蛋白,以此為靶,利用噬菌體肽庫技術,高通量液相淘選CD133的特異性短肽.應用夾心EL ISA選擇齣結閤較彊的剋隆.提取DNA測序,通過競爭性阻斷實驗驗證其特異性,根據噬菌體基因序列推導齣多肽序列.通過免疫熒光技術初步驗證閤成多肽和人大腸癌細胞的結閤情況.結果 4輪液相篩選後,與CD133特異性結閤的噬菌體得到有效富集,第4輪與第1輪相比,富集瞭388倍.經ELISA鑒定的20箇噬菌體單剋隆中,有13箇與CD133有較高親和力,具有暘性意義.經比對得到11條完全一緻的氨基痠序列TISWPPR,2條完全一緻的氨基痠序列STTKLAL,競爭性阻斷ELISA實驗錶明第一條特異性較彊.結論 成功利用噬菌體肽庫技術,淘選齣1條可和人CD133特異性結閤的高親和力短肽,為後續CD133的研究奠定瞭基礎,錶明從噬菌體肽庫中液相淘選生物素化小分子的高親和力多肽的方法切實可行.
목적 사선가여인종류간세포표면표기물CD133특이성결합적단태병진행초보감정.방법 수선합성인종류간세포표면표기물CD133세포외편단적생물소화단백,이차위파,이용서균체태고기술,고통량액상도선CD133적특이성단태.응용협심EL ISA선택출결합교강적극륭.제취DNA측서,통과경쟁성조단실험험증기특이성,근거서균체기인서렬추도출다태서렬.통과면역형광기술초보험증합성다태화인대장암세포적결합정황.결과 4륜액상사선후,여CD133특이성결합적서균체득도유효부집,제4륜여제1륜상비,부집료388배.경ELISA감정적20개서균체단극륭중,유13개여CD133유교고친화력,구유양성의의.경비대득도11조완전일치적안기산서렬TISWPPR,2조완전일치적안기산서렬STTKLAL,경쟁성조단ELISA실험표명제일조특이성교강.결론 성공이용서균체태고기술,도선출1조가화인CD133특이성결합적고친화력단태,위후속CD133적연구전정료기출,표명종서균체태고중액상도선생물소화소분자적고친화력다태적방법절실가행.
