烟台大学学报（自然科学与工程版）
煙檯大學學報（自然科學與工程版）
연태대학학보（자연과학여공정판）
JOURNAL OF YANTAI UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE AND ENGINEERING EDITION）
2011年
2期
116-120
,共5页
杜广营%张国营%刘昆%栾金灵%段慧英
杜廣營%張國營%劉昆%欒金靈%段慧英
두엄영%장국영%류곤%란금령%단혜영
白细胞介素-18%白细胞介素-2%pBV220载体%原核表达%融合蛋白
白細胞介素-18%白細胞介素-2%pBV220載體%原覈錶達%融閤蛋白
백세포개소-18%백세포개소-2%pBV220재체%원핵표체%융합단백
构建IL-18和IL-2成熟区的融合基因IL18-IL2,并实现其在大肠埃氏菌中的大量表达.抽提经PHA刺激增殖的人淋巴细胞总RNA,RT-PCR法获得IL-18和IL-2基因的成熟区序列,并通过一段Linker相连得到融合基因IL18-IL2;将IL18-IL2克隆至原核表达载体pBV220,并转化至大肠埃氏菌BL21(DE3);阳性克隆经42℃温度诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达情况及正确性.经SDS-PAGE分析,融合基因IL18-IL2在宿主菌中能够表达,其相对表观分子质量约为34.5 kD;Western blot进一步证明重组蛋白正确.实验结果表明,已成功构建了表达人IL18-IL2的菌株,为进一步研究融合蛋白IL18-IL2体内外抗肿瘤活性提供了基础.
構建IL-18和IL-2成熟區的融閤基因IL18-IL2,併實現其在大腸埃氏菌中的大量錶達.抽提經PHA刺激增殖的人淋巴細胞總RNA,RT-PCR法穫得IL-18和IL-2基因的成熟區序列,併通過一段Linker相連得到融閤基因IL18-IL2;將IL18-IL2剋隆至原覈錶達載體pBV220,併轉化至大腸埃氏菌BL21(DE3);暘性剋隆經42℃溫度誘導錶達後用SDS-PAGE和Western blot分析重組蛋白的錶達情況及正確性.經SDS-PAGE分析,融閤基因IL18-IL2在宿主菌中能夠錶達,其相對錶觀分子質量約為34.5 kD;Western blot進一步證明重組蛋白正確.實驗結果錶明,已成功構建瞭錶達人IL18-IL2的菌株,為進一步研究融閤蛋白IL18-IL2體內外抗腫瘤活性提供瞭基礎.
구건IL-18화IL-2성숙구적융합기인IL18-IL2,병실현기재대장애씨균중적대량표체.추제경PHA자격증식적인림파세포총RNA,RT-PCR법획득IL-18화IL-2기인적성숙구서렬,병통과일단Linker상련득도융합기인IL18-IL2;장IL18-IL2극륭지원핵표체재체pBV220,병전화지대장애씨균BL21(DE3);양성극륭경42℃온도유도표체후용SDS-PAGE화Western blot분석중조단백적표체정황급정학성.경SDS-PAGE분석,융합기인IL18-IL2재숙주균중능구표체,기상대표관분자질량약위34.5 kD;Western blot진일보증명중조단백정학.실험결과표명,이성공구건료표체인IL18-IL2적균주,위진일보연구융합단백IL18-IL2체내외항종류활성제공료기출.
