生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
9期
187-192
,共6页
鞭毛再生%细胞周期%衣藻%酵母双杂交文库%SMART技术
鞭毛再生%細胞週期%衣藻%酵母雙雜交文庫%SMART技術
편모재생%세포주기%의조%효모쌍잡교문고%SMART기술
衣藻是用来研究植物光合作用和动物纤毛常用的模式生物.为了研究蛋白质之间的相互作用,利用SMART技术构建了衣藻的酵母双杂交文库.使用Trizol试剂提取鞭毛再生过程和光周期培养的细胞进入分裂前的衣藻细胞的总RNA,经过Oligotex纯化得到mRNA；应用SMART技术和LD-PCR合成双链cDNA,经过CHROMA SPIN TE-400柱子去除短片段的cDNA;cDNA和线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母Y187构建酵母双杂交文库.库容达到3.0 × 106CFU,重组率为70％,插入片段平均长度为0.6 kb.以上结果说明该文库质量较好,能够通过筛选文库得到与目的蛋白互相作用的蛋白质,为寻找蛋白质的作用伴侣打下基础.
衣藻是用來研究植物光閤作用和動物纖毛常用的模式生物.為瞭研究蛋白質之間的相互作用,利用SMART技術構建瞭衣藻的酵母雙雜交文庫.使用Trizol試劑提取鞭毛再生過程和光週期培養的細胞進入分裂前的衣藻細胞的總RNA,經過Oligotex純化得到mRNA；應用SMART技術和LD-PCR閤成雙鏈cDNA,經過CHROMA SPIN TE-400柱子去除短片段的cDNA;cDNA和線性化載體pGADT7-Rec共轉化酵母Y187構建酵母雙雜交文庫.庫容達到3.0 × 106CFU,重組率為70％,插入片段平均長度為0.6 kb.以上結果說明該文庫質量較好,能夠通過篩選文庫得到與目的蛋白互相作用的蛋白質,為尋找蛋白質的作用伴侶打下基礎.
의조시용래연구식물광합작용화동물섬모상용적모식생물.위료연구단백질지간적상호작용,이용SMART기술구건료의조적효모쌍잡교문고.사용Trizol시제제취편모재생과정화광주기배양적세포진입분렬전적의조세포적총RNA,경과Oligotex순화득도mRNA；응용SMART기술화LD-PCR합성쌍련cDNA,경과CHROMA SPIN TE-400주자거제단편단적cDNA;cDNA화선성화재체pGADT7-Rec공전화효모Y187구건효모쌍잡교문고.고용체도3.0 × 106CFU,중조솔위70％,삽입편단평균장도위0.6 kb.이상결과설명해문고질량교호,능구통과사선문고득도여목적단백호상작용적단백질,위심조단백질적작용반려타하기출.
