现代临床医学生物工程学杂志
現代臨床醫學生物工程學雜誌
현대림상의학생물공정학잡지
2006年
4期
328-332
,共5页
程璘令%李冰%涂洪斌%刘启才%冉丕鑫
程璘令%李冰%塗洪斌%劉啟纔%冉丕鑫
정린령%리빙%도홍빈%류계재%염비흠
慢性阻塞性肺病%γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶%氧化应激%E-box元件%大鼠
慢性阻塞性肺病%γ-穀氨酰半胱氨痠閤成酶%氧化應激%E-box元件%大鼠
만성조새성폐병%γ-곡안선반광안산합성매%양화응격%E-box원건%대서
目的 研究抗氧化基因--大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的功能区及其调控表达.方法 克隆1.76 kb大鼠γ-GCS基因的重链亚单位--GCLC基因的上游调控序列,并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc (GCLC/pGL-3).利用嵌顿缺失方法构建GCLC基因的缺失体,并将其表达载体转染大鼠肺泡上皮细胞,在细胞中分析该基因的调控区域.通过该方法初步发现GCLC基因的上游调控序列的-745～-705 bp属负性调控区域.利用EMSA和supershift证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合.将USF的真核表达载体和逆转录病毒表达载体分别导入肺泡上皮细胞,观察GCLC基因的转录活性和GCLC蛋白的表达情况.结果 GCLC基因的-403～-111 bp和-705～-613 bp区段属正调控区域;-745～-705 bp属负调控区域.EMS和supershift证实上游刺激因子(USF)能与该负调控区域的E-box元件结合抑制GCLC基因的转录和表达.结论 发现GCLC基因其中2个正调控区域(-403～-111 bp与-705～-613 bp)和1个负调控区域(-745～-705 bp), 其中负调控区域-745～-705 bp上的 E-box元件通过与USF结合介导GCLC基因的负性表达调控.
目的 研究抗氧化基因--大鼠γ-穀氨酰半胱氨痠閤成酶(γ-GCS)基因的功能區及其調控錶達.方法 剋隆1.76 kb大鼠γ-GCS基因的重鏈亞單位--GCLC基因的上遊調控序列,併構建含熒光素酶基因的報道載體GCLC-Luc (GCLC/pGL-3).利用嵌頓缺失方法構建GCLC基因的缺失體,併將其錶達載體轉染大鼠肺泡上皮細胞,在細胞中分析該基因的調控區域.通過該方法初步髮現GCLC基因的上遊調控序列的-745～-705 bp屬負性調控區域.利用EMSA和supershift證實大鼠肺泡上皮細胞GCLC基因負調控區域的E-box元件能與轉錄因子USF1/USF2特異性的結閤.將USF的真覈錶達載體和逆轉錄病毒錶達載體分彆導入肺泡上皮細胞,觀察GCLC基因的轉錄活性和GCLC蛋白的錶達情況.結果 GCLC基因的-403～-111 bp和-705～-613 bp區段屬正調控區域;-745～-705 bp屬負調控區域.EMS和supershift證實上遊刺激因子(USF)能與該負調控區域的E-box元件結閤抑製GCLC基因的轉錄和錶達.結論 髮現GCLC基因其中2箇正調控區域(-403～-111 bp與-705～-613 bp)和1箇負調控區域(-745～-705 bp), 其中負調控區域-745～-705 bp上的 E-box元件通過與USF結閤介導GCLC基因的負性錶達調控.
목적 연구항양화기인--대서γ-곡안선반광안산합성매(γ-GCS)기인적공능구급기조공표체.방법 극륭1.76 kb대서γ-GCS기인적중련아단위--GCLC기인적상유조공서렬,병구건함형광소매기인적보도재체GCLC-Luc (GCLC/pGL-3).이용감돈결실방법구건GCLC기인적결실체,병장기표체재체전염대서폐포상피세포,재세포중분석해기인적조공구역.통과해방법초보발현GCLC기인적상유조공서렬적-745～-705 bp속부성조공구역.이용EMSA화supershift증실대서폐포상피세포GCLC기인부조공구역적E-box원건능여전록인자USF1/USF2특이성적결합.장USF적진핵표체재체화역전록병독표체재체분별도입폐포상피세포,관찰GCLC기인적전록활성화GCLC단백적표체정황.결과 GCLC기인적-403～-111 bp화-705～-613 bp구단속정조공구역;-745～-705 bp속부조공구역.EMS화supershift증실상유자격인자(USF)능여해부조공구역적E-box원건결합억제GCLC기인적전록화표체.결론 발현GCLC기인기중2개정조공구역(-403～-111 bp여-705～-613 bp)화1개부조공구역(-745～-705 bp), 기중부조공구역-745～-705 bp상적 E-box원건통과여USF결합개도GCLC기인적부성표체조공.
