生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
25-29
,共5页
付建红%姚斌%杨浩萌%黄火清%石玉瑚
付建紅%姚斌%楊浩萌%黃火清%石玉瑚
부건홍%요빈%양호맹%황화청%석옥호
白地霉ch-3%低温脂肪酶%基因克隆%巴斯德毕赤酵母%表达
白地黴ch-3%低溫脂肪酶%基因剋隆%巴斯德畢赤酵母%錶達
백지매ch-3%저온지방매%기인극륭%파사덕필적효모%표체
目的:脂肪酶是世界主要工业用酶制剂之一,用基因工程方法克隆与表达白地霉(Geotrichum candidum)ch-3菌株的低温脂肪酶基因.方法:用PCR方法从白地霉ch-3的总DNA中扩增得到一种低温脂肪酶基因lip,将PCR产物连接到pBluescript Ⅱ SK(+)载体上,测序证明正确后再将基因lip插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9α中,含有目的基因的重组质粒在毕赤酵母中进行诱导表达.结果:毕赤酵母成功表达了lip基因,其活性为37U/mL.SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶蛋白相对分子质量约62kDa,比推测分子量大,lip的表达产物可能被糖基化修饰.初步研究表明:重组脂肪酶最适温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活性,对热敏感.结论:实现了低温脂肪酶在毕赤酵母的成功表达,为进一步研究低温酶催化机制和工业化应用打下基础.
目的:脂肪酶是世界主要工業用酶製劑之一,用基因工程方法剋隆與錶達白地黴(Geotrichum candidum)ch-3菌株的低溫脂肪酶基因.方法:用PCR方法從白地黴ch-3的總DNA中擴增得到一種低溫脂肪酶基因lip,將PCR產物連接到pBluescript Ⅱ SK(+)載體上,測序證明正確後再將基因lip插入到巴斯德畢赤酵母錶達載體pPIC9α中,含有目的基因的重組質粒在畢赤酵母中進行誘導錶達.結果:畢赤酵母成功錶達瞭lip基因,其活性為37U/mL.SDS-PAGE分析顯示錶達的脂肪酶蛋白相對分子質量約62kDa,比推測分子量大,lip的錶達產物可能被糖基化脩飾.初步研究錶明:重組脂肪酶最適溫度為35℃,在0℃仍可保持66%的相對酶活性,對熱敏感.結論:實現瞭低溫脂肪酶在畢赤酵母的成功錶達,為進一步研究低溫酶催化機製和工業化應用打下基礎.
목적:지방매시세계주요공업용매제제지일,용기인공정방법극륭여표체백지매(Geotrichum candidum)ch-3균주적저온지방매기인.방법:용PCR방법종백지매ch-3적총DNA중확증득도일충저온지방매기인lip,장PCR산물련접도pBluescript Ⅱ SK(+)재체상,측서증명정학후재장기인lip삽입도파사덕필적효모표체재체pPIC9α중,함유목적기인적중조질립재필적효모중진행유도표체.결과:필적효모성공표체료lip기인,기활성위37U/mL.SDS-PAGE분석현시표체적지방매단백상대분자질량약62kDa,비추측분자량대,lip적표체산물가능피당기화수식.초보연구표명:중조지방매최괄온도위35℃,재0℃잉가보지66%적상대매활성,대열민감.결론:실현료저온지방매재필적효모적성공표체,위진일보연구저온매최화궤제화공업화응용타하기출.
