中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
10期
721-724
,共4页
李晓恒%吴少庭%付小强%甘燕%王芳%雷蕾
李曉恆%吳少庭%付小彊%甘燕%王芳%雷蕾
리효항%오소정%부소강%감연%왕방%뢰뢰
分枝杆菌,结核%Ag85B%分枝杆菌,耻垢%重组BCG
分枝桿菌,結覈%Ag85B%分枝桿菌,恥垢%重組BCG
분지간균,결핵%Ag85B%분지간균,치구%중조BCG
目的 体外扩增结核杆菌Ag85B基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-Ag85B,并重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155). 方法 采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌Ag85B基因,克隆入pGEMT载体;构建亚克隆ps3000-Ag85B大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,电转化方法将有Ag85B基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中.热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察Ag85B蛋白的表达,Western blot鉴定其生物学活性. 结果 PCR扩增结核杆菌Ag85B基因片段大小为990 bp,构建的穿梭质粒ps3000-Ag85B酶切片段为990 bp,与理论值相符.经Western blot检测,该重组耻垢杆菌表达蛋白能被结核病患者血清识别. 结论 Ag85B重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达Ag85B蛋白的重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础.
目的 體外擴增結覈桿菌Ag85B基因,構建大腸埃希菌-分枝桿菌穿梭質粒ps3000-Ag85B,併重組恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis mc2155). 方法 採用聚閤酶鏈式反應(PCR)方法,體外擴增結覈桿菌Ag85B基因,剋隆入pGEMT載體;構建亞剋隆ps3000-Ag85B大腸埃希菌-分枝桿菌穿梭質粒,電轉化方法將有Ag85B基因的穿梭質粒轉化到恥垢分枝桿菌中.熱誘導此重組恥垢分枝桿菌,用SDS-PAGE電泳觀察Ag85B蛋白的錶達,Western blot鑒定其生物學活性. 結果 PCR擴增結覈桿菌Ag85B基因片段大小為990 bp,構建的穿梭質粒ps3000-Ag85B酶切片段為990 bp,與理論值相符.經Western blot檢測,該重組恥垢桿菌錶達蛋白能被結覈病患者血清識彆. 結論 Ag85B重組恥垢分枝桿菌構建成功,為下一步錶達Ag85B蛋白的重組BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定瞭基礎.
목적 체외확증결핵간균Ag85B기인,구건대장애희균-분지간균천사질립ps3000-Ag85B,병중조치구분지간균(Mycobacterium smegmatis mc2155). 방법 채용취합매련식반응(PCR)방법,체외확증결핵간균Ag85B기인,극륭입pGEMT재체;구건아극륭ps3000-Ag85B대장애희균-분지간균천사질립,전전화방법장유Ag85B기인적천사질립전화도치구분지간균중.열유도차중조치구분지간균,용SDS-PAGE전영관찰Ag85B단백적표체,Western blot감정기생물학활성. 결과 PCR확증결핵간균Ag85B기인편단대소위990 bp,구건적천사질립ps3000-Ag85B매절편단위990 bp,여이론치상부.경Western blot검측,해중조치구간균표체단백능피결핵병환자혈청식별. 결론 Ag85B중조치구분지간균구건성공,위하일보표체Ag85B단백적중조BCG(Bacilli Calmette-Guérin)역묘적연구전정료기출.
