华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2009年
1期
40-43
,共4页
陈红英%宋凌云%崔保安%胡功政%贾艳艳%郭显坡
陳紅英%宋凌雲%崔保安%鬍功政%賈豔豔%郭顯坡
진홍영%송릉운%최보안%호공정%가염염%곽현파
鸡%α干扰素%克隆%原核表达%抗病毒活性
鷄%α榦擾素%剋隆%原覈錶達%抗病毒活性
계%α간우소%극륭%원핵표체%항병독활성
通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序.序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag 融合.经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白.表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103 U/mg.本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性.
通過PCR技術從囉曼鷄肝髒基因組中擴增鷄α榦擾素(ChIFN-α)全基因,併剋隆和測序.序列分析錶明,ChIFN-α基因全長為582 bp,亞剋隆其成熟蛋白編碼基因489 bp,利用基因重組技術構建瞭重組質粒,使ChIFN-α置于原覈錶達載體pQE30的T5啟動子下併同6×His(多聚組氨痠標籤)-Tag 融閤.經酶切和PCR鑒定,DNA測序證實重組質粒pQEChIFN-α構建正確;將pQEChIFN-α轉化大腸桿菌M15感受態細胞,用IPTG誘導錶達.SDS-PAGE和Western blot證實錶達齣分子質量為19.80 kDa的融閤蛋白.錶達的蛋白以包涵體形式存在,經變性、複性處理後,在Vero細胞上抗水泡性口炎病毒的活性為1.16×103 U/mg.本研究成功錶達瞭ChIFN-α,錶達的重組蛋白具有一定的生物活性.
통과PCR기술종라만계간장기인조중확증계α간우소(ChIFN-α)전기인,병극륭화측서.서렬분석표명,ChIFN-α기인전장위582 bp,아극륭기성숙단백편마기인489 bp,이용기인중조기술구건료중조질립,사ChIFN-α치우원핵표체재체pQE30적T5계동자하병동6×His(다취조안산표첨)-Tag 융합.경매절화PCR감정,DNA측서증실중조질립pQEChIFN-α구건정학;장pQEChIFN-α전화대장간균M15감수태세포,용IPTG유도표체.SDS-PAGE화Western blot증실표체출분자질량위19.80 kDa적융합단백.표체적단백이포함체형식존재,경변성、복성처리후,재Vero세포상항수포성구염병독적활성위1.16×103 U/mg.본연구성공표체료ChIFN-α,표체적중조단백구유일정적생물활성.
