中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2010年
5期
483-487
,共5页
马昌云%吴芳%孔繁义%周文艳
馬昌雲%吳芳%孔繁義%週文豔
마창운%오방%공번의%주문염
树突状细胞%肿瘤可溶性抗原%金黄色葡萄球菌肠毒素A%肺肿瘤%超抗原
樹突狀細胞%腫瘤可溶性抗原%金黃色葡萄毬菌腸毒素A%肺腫瘤%超抗原
수돌상세포%종류가용성항원%금황색포도구균장독소A%폐종류%초항원
背景与目的 恶性肿瘤患者免疫力低下,缺乏强有力的抗肿瘤免疫应答,其原因是肿瘤细胞的抗原性较弱,而且抗原提呈细胞的功能低下,使肿瘤抗原不能有效地提呈给淋巴细胞.因此如何能有效地诱导出抗肿瘤免疫效应是一个非常关键的问题.本研究通过建立体外培养树突状细胞(dendritic cells, DC)的方法并观察其诱导的抗肺癌作用的研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供实验依据.方法 3 mol/L氯化钾法提取人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽;从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中用GMCSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增DC,用流式细胞仪FCM及免疫染色法分析鉴定DC;肺癌肿瘤可溶性抗原(tumorsoluble antigen, TSA)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A, SEA)联合修饰致敏DC;以联合抗原修饰后的DC、单纯肺癌抗原TSA致敏的DC、单纯超抗原SEA修饰的DC和未经抗原修饰的DC分别与外周血T淋巴细胞共同孵育,刺激T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌抗原的特异性CTL(作为效应细胞分别称为TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、SEA-DCL、DCL);采用MTT法检测各效应细胞对靶细胞GLC-82、肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的抗癌活性;镜下观察DC、效应细胞形态及对靶细胞的杀伤过程.结果 诱导出高表达CD1a、HLADR、CD80具有典型树突状细胞特性的DC;TSA-SEA-DCL对靶细胞GLC-82的杀伤率明显高于TSA-DCL、SEA-DCL及DCL,亦明显高于对K562细胞的杀伤率;与靶细胞共育时镜下发现效应细胞CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围,致使肿瘤细胞发生变性坏死及凋亡.结论 本实验方法能成功诱导出具有典型特征的成熟DC,肺癌TSA联合超抗原SEA诱导的DC疫苗对肺癌细胞有高效特异杀伤作用.
揹景與目的 噁性腫瘤患者免疫力低下,缺乏彊有力的抗腫瘤免疫應答,其原因是腫瘤細胞的抗原性較弱,而且抗原提呈細胞的功能低下,使腫瘤抗原不能有效地提呈給淋巴細胞.因此如何能有效地誘導齣抗腫瘤免疫效應是一箇非常關鍵的問題.本研究通過建立體外培養樹突狀細胞(dendritic cells, DC)的方法併觀察其誘導的抗肺癌作用的研究,為以DC為基礎的肺癌免疫瘤苗的臨床應用提供實驗依據.方法 3 mol/L氯化鉀法提取人肺腺癌細胞GLC-82的可溶性抗原多肽;從人外週血單箇覈細胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中用GMCSF、IL-4和TNF-α體外誘導擴增DC,用流式細胞儀FCM及免疫染色法分析鑒定DC;肺癌腫瘤可溶性抗原(tumorsoluble antigen, TSA)和超抗原金黃色葡萄毬菌腸毒素A(staphylococcal enterotoxin A, SEA)聯閤脩飾緻敏DC;以聯閤抗原脩飾後的DC、單純肺癌抗原TSA緻敏的DC、單純超抗原SEA脩飾的DC和未經抗原脩飾的DC分彆與外週血T淋巴細胞共同孵育,刺激T淋巴細胞活化增殖,誘導產生具有識彆肺癌抗原的特異性CTL(作為效應細胞分彆稱為TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、SEA-DCL、DCL);採用MTT法檢測各效應細胞對靶細胞GLC-82、肺癌CALU-6和人紅白血病K562細胞的抗癌活性;鏡下觀察DC、效應細胞形態及對靶細胞的殺傷過程.結果 誘導齣高錶達CD1a、HLADR、CD80具有典型樹突狀細胞特性的DC;TSA-SEA-DCL對靶細胞GLC-82的殺傷率明顯高于TSA-DCL、SEA-DCL及DCL,亦明顯高于對K562細胞的殺傷率;與靶細胞共育時鏡下髮現效應細胞CTL靠近併聚集在腫瘤細胞週圍,緻使腫瘤細胞髮生變性壞死及凋亡.結論 本實驗方法能成功誘導齣具有典型特徵的成熟DC,肺癌TSA聯閤超抗原SEA誘導的DC疫苗對肺癌細胞有高效特異殺傷作用.
배경여목적 악성종류환자면역력저하,결핍강유력적항종류면역응답,기원인시종류세포적항원성교약,이차항원제정세포적공능저하,사종류항원불능유효지제정급림파세포.인차여하능유효지유도출항종류면역효응시일개비상관건적문제.본연구통과건입체외배양수돌상세포(dendritic cells, DC)적방법병관찰기유도적항폐암작용적연구,위이DC위기출적폐암면역류묘적림상응용제공실험의거.방법 3 mol/L록화갑법제취인폐선암세포GLC-82적가용성항원다태;종인외주혈단개핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)중용GMCSF、IL-4화TNF-α체외유도확증DC,용류식세포의FCM급면역염색법분석감정DC;폐암종류가용성항원(tumorsoluble antigen, TSA)화초항원금황색포도구균장독소A(staphylococcal enterotoxin A, SEA)연합수식치민DC;이연합항원수식후적DC、단순폐암항원TSA치민적DC、단순초항원SEA수식적DC화미경항원수식적DC분별여외주혈T림파세포공동부육,자격T림파세포활화증식,유도산생구유식별폐암항원적특이성CTL(작위효응세포분별칭위TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、SEA-DCL、DCL);채용MTT법검측각효응세포대파세포GLC-82、폐암CALU-6화인홍백혈병K562세포적항암활성;경하관찰DC、효응세포형태급대파세포적살상과정.결과 유도출고표체CD1a、HLADR、CD80구유전형수돌상세포특성적DC;TSA-SEA-DCL대파세포GLC-82적살상솔명현고우TSA-DCL、SEA-DCL급DCL,역명현고우대K562세포적살상솔;여파세포공육시경하발현효응세포CTL고근병취집재종류세포주위,치사종류세포발생변성배사급조망.결론 본실험방법능성공유도출구유전형특정적성숙DC,폐암TSA연합초항원SEA유도적DC역묘대폐암세포유고효특이살상작용.
