工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2011年
1期
5-8
,共4页
王晓娟%黎明%高伟%赵洪坤%杜连祥%路福平
王曉娟%黎明%高偉%趙洪坤%杜連祥%路福平
왕효연%려명%고위%조홍곤%두련상%로복평
蚓激酶%可溶性表达%TrxA
蚓激酶%可溶性錶達%TrxA
인격매%가용성표체%TrxA
应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因F238,并将其克隆至大肠杆菌质粒pET22b-TrxA中,构建双顺反子表达载体p17rx-F238.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/LIPTG、30℃条件下诱导6 h,经SDS-PAGE证实蚓激酶成熟肽蛋白获得了高效表达,所表达的蛋白产物相对分子量与预期的26 kDa相符,且都是可溶性蛋白,表明分子伴侣TrxA起到了帮助目的蛋白正确折叠的作用.利用血纤维蛋白法对产物活性进行了测定,确定其不仅具有激酶作用,而且具有直接溶栓活性.最高活力可迭180 U/mL(尿激酶单位).
應用PCR技術擴增穫得蚓激酶成熟肽基因F238,併將其剋隆至大腸桿菌質粒pET22b-TrxA中,構建雙順反子錶達載體p17rx-F238.重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),1.0 mmol/LIPTG、30℃條件下誘導6 h,經SDS-PAGE證實蚓激酶成熟肽蛋白穫得瞭高效錶達,所錶達的蛋白產物相對分子量與預期的26 kDa相符,且都是可溶性蛋白,錶明分子伴侶TrxA起到瞭幫助目的蛋白正確摺疊的作用.利用血纖維蛋白法對產物活性進行瞭測定,確定其不僅具有激酶作用,而且具有直接溶栓活性.最高活力可迭180 U/mL(尿激酶單位).
응용PCR기술확증획득인격매성숙태기인F238,병장기극륭지대장간균질립pET22b-TrxA중,구건쌍순반자표체재체p17rx-F238.중조질립전화대장간균BL21(DE3),1.0 mmol/LIPTG、30℃조건하유도6 h,경SDS-PAGE증실인격매성숙태단백획득료고효표체,소표체적단백산물상대분자량여예기적26 kDa상부,차도시가용성단백,표명분자반려TrxA기도료방조목적단백정학절첩적작용.이용혈섬유단백법대산물활성진행료측정,학정기불부구유격매작용,이차구유직접용전활성.최고활력가질180 U/mL(뇨격매단위).
