上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2011年
2期
69-74
,共6页
王雨晨%王君%王元凯%严亚贤
王雨晨%王君%王元凱%嚴亞賢
왕우신%왕군%왕원개%엄아현
伏马毒素B1%半抗原%单克隆抗体%间接竞争ELISA
伏馬毒素B1%半抗原%單剋隆抗體%間接競爭ELISA
복마독소B1%반항원%단극륭항체%간접경쟁ELISA
采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和蛋白卵清白蛋白(OVA)偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1.OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体.经三次亚克隆后,筛选出两株(6H3,6H11)能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgGl,轻链为k型.采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达1:16000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度(IC50)为8.26ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应.利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93～73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%～102%.
採用戊二醛法將半抗原伏馬毒素B1分彆與載體蛋白鑰孔血藍蛋白(KLH)和蛋白卵清白蛋白(OVA)偶聯成為完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1.OVA-FB1作為包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作為免疫原免疫8週齡Balb/c小鼠,應用雜交瘤細胞融閤技術製備單剋隆抗體.經三次亞剋隆後,篩選齣兩株(6H3,6H11)能特異、穩定分泌抗FB1單剋隆抗體的雜交瘤細胞株.選擇其中一株雜交瘤細胞通過體內誘生腹水的方法製備單剋隆抗體,經檢測錶明單剋隆抗體的亞型為IgGl,輕鏈為k型.採用間接ELISA測得腹水純化後效價達1:16000,抗體對伏馬毒素的半數阻斷濃度(IC50)為8.26ng/mL,對玉米赤黴烯酮、黃麯黴素B1等結構類似物幾乎不存在交扠反應,與其他結構的氯丙嗪、鏈黴素等無交扠反應.利用穫得的抗FB1單剋隆抗體,建立瞭間接競爭ELISA檢測方法,檢測靈敏度為0.44 ng/mL,檢測線性範圍為0.93～73.06 ng/mL,加標迴收率在線性範圍內達到迴收率可達78.4%～102%.
채용무이철법장반항원복마독소B1분별여재체단백약공혈람단백(KLH)화단백란청백단백(OVA)우련성위완전항원KLH-FB1화OVA-FB1.OVA-FB1작위포피항원건립ELISA방법;KLH-FB1작위면역원면역8주령Balb/c소서,응용잡교류세포융합기술제비단극륭항체.경삼차아극륭후,사선출량주(6H3,6H11)능특이、은정분비항FB1단극륭항체적잡교류세포주.선택기중일주잡교류세포통과체내유생복수적방법제비단극륭항체,경검측표명단극륭항체적아형위IgGl,경련위k형.채용간접ELISA측득복수순화후효개체1:16000,항체대복마독소적반수조단농도(IC50)위8.26ng/mL,대옥미적매희동、황곡매소B1등결구유사물궤호불존재교차반응,여기타결구적록병진、련매소등무교차반응.이용획득적항FB1단극륭항체,건립료간접경쟁ELISA검측방법,검측령민도위0.44 ng/mL,검측선성범위위0.93～73.06 ng/mL,가표회수솔재선성범위내체도회수솔가체78.4%～102%.
