生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
5期
151-156,171
,共7页
谷氨酸棒杆菌%L-色氨酸%关键酶%过量表达%串联表达
穀氨痠棒桿菌%L-色氨痠%關鍵酶%過量錶達%串聯錶達
곡안산봉간균%L-색안산%관건매%과량표체%천련표체
以谷氨酸棒杆菌SPT9(Phe-、Tyr-、4-FPr、6-FTr)为出发菌株,采用PCR方法扩增色氨酸合成途径中解除了反馈抑制的关键酶aroⅡ和trpEGD基因,应用大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌穿梭表达载体pEC-XK99E在谷氨酸棒杆菌SPT9中对其进行了分别过量表达和串联过量表达.首先对aroⅡ和trpEGD基因分别进行过量表达,得到菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD,摇瓶发酵试验表明,菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD的色氨酸产量相对于出发菌株SPT9分别提高了30%、23%;进一步对aroⅡ和trpEGD进行了串联过量表达,得到菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ,摇瓶发酵试验表明,该菌株色氨酸产量相对于出发菌株SPT9提高了84%.荧光定量PCR检测表明,菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ中aroⅡ、trpEGD基因的表达量分别为出发菌株SPT9的4.0倍和1.3倍.
以穀氨痠棒桿菌SPT9(Phe-、Tyr-、4-FPr、6-FTr)為齣髮菌株,採用PCR方法擴增色氨痠閤成途徑中解除瞭反饋抑製的關鍵酶aroⅡ和trpEGD基因,應用大腸桿菌-穀氨痠棒桿菌穿梭錶達載體pEC-XK99E在穀氨痠棒桿菌SPT9中對其進行瞭分彆過量錶達和串聯過量錶達.首先對aroⅡ和trpEGD基因分彆進行過量錶達,得到菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD,搖瓶髮酵試驗錶明,菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD的色氨痠產量相對于齣髮菌株SPT9分彆提高瞭30%、23%;進一步對aroⅡ和trpEGD進行瞭串聯過量錶達,得到菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ,搖瓶髮酵試驗錶明,該菌株色氨痠產量相對于齣髮菌株SPT9提高瞭84%.熒光定量PCR檢測錶明,菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ中aroⅡ、trpEGD基因的錶達量分彆為齣髮菌株SPT9的4.0倍和1.3倍.
이곡안산봉간균SPT9(Phe-、Tyr-、4-FPr、6-FTr)위출발균주,채용PCR방법확증색안산합성도경중해제료반궤억제적관건매aroⅡ화trpEGD기인,응용대장간균-곡안산봉간균천사표체재체pEC-XK99E재곡안산봉간균SPT9중대기진행료분별과량표체화천련과량표체.수선대aroⅡ화trpEGD기인분별진행과량표체,득도균주SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD,요병발효시험표명,균주SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD적색안산산량상대우출발균주SPT9분별제고료30%、23%;진일보대aroⅡ화trpEGD진행료천련과량표체,득도균주SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ,요병발효시험표명,해균주색안산산량상대우출발균주SPT9제고료84%.형광정량PCR검측표명,균주SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ중aroⅡ、trpEGD기인적표체량분별위출발균주SPT9적4.0배화1.3배.
