华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
z1期
5-8
,共4页
刘钦松%张丛丛%刘孟刚%许彤
劉欽鬆%張叢叢%劉孟剛%許彤
류흠송%장총총%류맹강%허동
白细胞介素%基因克隆%原核表达
白細胞介素%基因剋隆%原覈錶達
백세포개소%기인극륭%원핵표체
构建人源白介素(h-IL2)基因的表达载体,并尝试在原核细胞中诱导表达,以用于进一步重组蛋白纯化和抗体生产.以h-IL2基因为模板,采用PCR技术扩增h-IL2基因,连接到pMD-18T载体中构建克隆载体,转化到感受态DH5α,提取质粒PCR、双酶切验证连接成功,经DNA测序鉴定基因序列与GenBank数据库收录h-IL2基因(NM_000586.3)序列一致；再将h-IL2基因插入到pGEX-4T-1构建表达载体,转化至感受态BL21( DE3),筛选阳性克隆IPTG诱导.SDS-PAGE验证成功表达融合蛋白GST-IL2.
構建人源白介素(h-IL2)基因的錶達載體,併嘗試在原覈細胞中誘導錶達,以用于進一步重組蛋白純化和抗體生產.以h-IL2基因為模闆,採用PCR技術擴增h-IL2基因,連接到pMD-18T載體中構建剋隆載體,轉化到感受態DH5α,提取質粒PCR、雙酶切驗證連接成功,經DNA測序鑒定基因序列與GenBank數據庫收錄h-IL2基因(NM_000586.3)序列一緻；再將h-IL2基因插入到pGEX-4T-1構建錶達載體,轉化至感受態BL21( DE3),篩選暘性剋隆IPTG誘導.SDS-PAGE驗證成功錶達融閤蛋白GST-IL2.
구건인원백개소(h-IL2)기인적표체재체,병상시재원핵세포중유도표체,이용우진일보중조단백순화화항체생산.이h-IL2기인위모판,채용PCR기술확증h-IL2기인,련접도pMD-18T재체중구건극륭재체,전화도감수태DH5α,제취질립PCR、쌍매절험증련접성공,경DNA측서감정기인서렬여GenBank수거고수록h-IL2기인(NM_000586.3)서렬일치；재장h-IL2기인삽입도pGEX-4T-1구건표체재체,전화지감수태BL21( DE3),사선양성극륭IPTG유도.SDS-PAGE험증성공표체융합단백GST-IL2.
