云南农业大学学报
雲南農業大學學報
운남농업대학학보
JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
2期
183-187
,共5页
陈培富%李红芳%鲁琼芬%陈俊
陳培富%李紅芳%魯瓊芬%陳俊
진배부%리홍방%로경분%진준
胸腺肽α1%原核表达系统%镍亲和层析%反相高效液相色谱%玫瑰花环试验
胸腺肽α1%原覈錶達繫統%鎳親和層析%反相高效液相色譜%玫瑰花環試驗
흉선태α1%원핵표체계통%얼친화층석%반상고효액상색보%매괴화배시험
将人工合成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白.融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱.所获穿过液中的重组胸腺肽α1(rTα1),经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离及分析,纯度分别为94.5％和72％.以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出与化学合成Tα1(sTα1)相同的生物学活性.
將人工閤成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到載體pBV222,轉化大腸桿菌DH5α菌株併置42℃誘導錶達可溶性融閤蛋白.融閤蛋白經鎳親和層析柱純化,加入腸激酶切割,再將酶切反應體繫迴到鎳親和層析柱.所穫穿過液中的重組胸腺肽α1(rTα1),經十二烷基硫痠鈉-聚苯烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和反相高效液相色譜(RP-HPLC)分離及分析,純度分彆為94.5％和72％.以癌癥患者外週血淋巴細胞開展玫瑰花環試驗,所穫rTα1純品顯示齣與化學閤成Tα1(sTα1)相同的生物學活性.
장인공합성적인흉선태α1(Tα1)기인삽입도재체pBV222,전화대장간균DH5α균주병치42℃유도표체가용성융합단백.융합단백경얼친화층석주순화,가입장격매절할,재장매절반응체계회도얼친화층석주.소획천과액중적중조흉선태α1(rTα1),경십이완기류산납-취분희선알응효전영(SDS-PAGE)화반상고효액상색보(RP-HPLC)분리급분석,순도분별위94.5％화72％.이암증환자외주혈림파세포개전매괴화배시험,소획rTα1순품현시출여화학합성Tα1(sTα1)상동적생물학활성.
