微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
미소은포자충CP15-P23-CP15/60기인적융합표체급항혈청적제비
Prokaryotic Expression of Cryptosporidium parvum CP15-P23-CP15/60 Fusion Gene and Preparation of Its Antiserum
  • 万方数据
    动物医学进展 동물의학진전
    PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
    2012年 7期 54-59 ,共6页

    秦培兰%米荣升%黄燕%周鹏%张国恩%苏庆美%呼高伟%曹薇%陈兆国

    진배란%미영승%황연%주붕%장국은%소경미%호고위%조미%진조국

    微小隐孢子虫%CP15-P23-CP15/60融合基因%原核表达%重叠延伸PCR 微小隱孢子蟲%CP15-P23-CP15/60融閤基因%原覈錶達%重疊延伸PCR
    미소은포자충%CP15-P23-CP15/60융합기인%원핵표체%중첩연신PCR
    以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因.利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因.将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性.
    이미소은포자충기인조DNA위모판,PCR확증획득자포자표면항원CP15、P23화CP15/60기인.이용중첩연신PCR(SOE PCR)장해3단기인편단천련재일기,각기인편단지간인입유성안기산접두(GGGGS)편마기인.장천련기인극륭도원핵표체재체pET-28a(+)상,구건중조표체재체,전화도대장애희균BL21(DE3)중진행유도표체,장순화적중조단백면역Balb/c소서제비다극륭항체.결과표명,획득료CP15-P23-CP15/60융합기인,병재대장애희균중고효표체,Western blot현시중조단백능피우항미소은포자충양성혈청식별,제비적다극륭항체능피중조단백특이성식별,표명획득적중조단백구유교호적항원성.
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