CAJ | 학술논문

目的探讨用细胞培养系统在体外培养新轮状病毒(RV).方法含新RV的病人粪便标本经高浓度胰蛋白酶(100 μg/ml)37℃作用1 h,接种于原代人胚肾(PHEK)细胞,37℃吸附1 h后,补加无血清含胰蛋白酶(100 μg/ml)的 DMEM,37℃转鼓培养3 d,收获细胞培养液,冻融1次,作为下一代培养的接种物,培养传代.用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫荧光(IF)、电镜(EM)、免疫电镜(IEM)等方法对细胞培养液进行病毒核酸、抗原及形态检查.结果从10份粪便标本中培养分离到1株病毒,定名为J19.该病毒在PHEK细胞上稳定培养传代(28代),其病毒核酸(dsRNA)电泳图型与初始用于接种细胞的粪便标本中的dsRNA电泳图型完全一致,而与A、B、C组RV dsRNA电泳图型明显不同.J19株感染的细胞与病人恢复期血清呈IF阳性反应,与成人腹泻轮状病毒(ADRV)腹泻病人恢复期血清、兔抗A组RV和兔抗ADRV血清均为IF阴性;EM和IEM在该病毒的细胞培养液中观察到,在形态上与初始接种物中病毒一样的轮状病毒颗粒,而且可被新RV腹泻病人恢复期血清凝集.结论成功地从含新RV的成人腹泻粪便标本中分离培养出1株轮状病毒--J19,并能在细胞稳定传代.J19株不属于A、B、C组RV,而是一种新RV.关于新RV在细胞上培养传代,本文是第一次报告.
목적탐토용세포배양계통재체외배양신륜상병독(RV).방법함신RV적병인분편표본경고농도이단백매(100 μg/ml)37℃작용1 h,접충우원대인배신(PHEK)세포,37℃흡부1 h후,보가무혈청함이단백매(100 μg/ml)적 DMEM,37℃전고배양3 d,수획세포배양액,동융1차,작위하일대배양적접충물,배양전대.용취병희선알응효전영、면역형광(IF)、전경(EM)、면역전경(IEM)등방법대세포배양액진행병독핵산、항원급형태검사.결과종10빈분편표본중배양분리도1주병독,정명위J19.해병독재PHEK세포상은정배양전대(28대),기병독핵산(dsRNA)전영도형여초시용우접충세포적분편표본중적dsRNA전영도형완전일치,이여A、B、C조RV dsRNA전영도형명현불동.J19주감염적세포여병인회복기혈청정IF양성반응,여성인복사륜상병독(ADRV)복사병인회복기혈청、토항A조RV화토항ADRV혈청균위IF음성;EM화IEM재해병독적세포배양액중관찰도,재형태상여초시접충물중병독일양적륜상병독과립,이차가피신RV복사병인회복기혈청응집.결론성공지종함신RV적성인복사분편표본중분리배양출1주륜상병독--J19,병능재세포은정전대.J19주불속우A、B、C조RV,이시일충신RV.관우신RV재세포상배양전대,본문시제일차보고.