复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2002年
1期
31-35
,共5页
吴永庆%江培翊%范长胜%柴运嵘%宋大新%黄伟达
吳永慶%江培翊%範長勝%柴運嶸%宋大新%黃偉達
오영경%강배익%범장성%시운영%송대신%황위체
ppsA基因%pckA基因%串联表达%大肠杆菌
ppsA基因%pckA基因%串聯錶達%大腸桿菌
ppsA기인%pckA기인%천련표체%대장간균
磷酸烯醇丙酮酸合成酶(PpsA)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PckA)是糖代谢中心途径中生成磷酸烯醇丙酮酸(PEP)的2个关键酶,在大肠杆菌中分别由ppsA和pckA基因编码.首先用PCR方法从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增得到了ppsA和pckA基因,并将ppsA,pckA以单独或串联的方式克隆到大肠杆菌表达质粒p pr上.构建成的质粒ppr-ppsA,ppr-pckA和ppPR-ppsA-pckA导人E coli P2392菌株中表达.结果表明,ppsA,pckA基因的单独表达使宿主细胞的PpsA和PckA酶活力分别提高到5 2和2.5倍;串联表达使宿主细胞PpsA和PckA酶活力分别提高到3.1和2.3倍,还使得以PEP为底物合成的3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸(DAHP)产量提高到2.1倍.2个基因串联表达比单个基因表达更有利于提高DAHP的产量。
燐痠烯醇丙酮痠閤成酶(PpsA)和燐痠烯醇丙酮痠羧激酶(PckA)是糖代謝中心途徑中生成燐痠烯醇丙酮痠(PEP)的2箇關鍵酶,在大腸桿菌中分彆由ppsA和pckA基因編碼.首先用PCR方法從大腸桿菌K12菌株基因組DNA擴增得到瞭ppsA和pckA基因,併將ppsA,pckA以單獨或串聯的方式剋隆到大腸桿菌錶達質粒p pr上.構建成的質粒ppr-ppsA,ppr-pckA和ppPR-ppsA-pckA導人E coli P2392菌株中錶達.結果錶明,ppsA,pckA基因的單獨錶達使宿主細胞的PpsA和PckA酶活力分彆提高到5 2和2.5倍;串聯錶達使宿主細胞PpsA和PckA酶活力分彆提高到3.1和2.3倍,還使得以PEP為底物閤成的3-脫氧-α-阿拉伯庚酮糖-7-燐痠(DAHP)產量提高到2.1倍.2箇基因串聯錶達比單箇基因錶達更有利于提高DAHP的產量。
린산희순병동산합성매(PpsA)화린산희순병동산최격매(PckA)시당대사중심도경중생성린산희순병동산(PEP)적2개관건매,재대장간균중분별유ppsA화pckA기인편마.수선용PCR방법종대장간균K12균주기인조DNA확증득도료ppsA화pckA기인,병장ppsA,pckA이단독혹천련적방식극륭도대장간균표체질립p pr상.구건성적질립ppr-ppsA,ppr-pckA화ppPR-ppsA-pckA도인E coli P2392균주중표체.결과표명,ppsA,pckA기인적단독표체사숙주세포적PpsA화PckA매활력분별제고도5 2화2.5배;천련표체사숙주세포PpsA화PckA매활력분별제고도3.1화2.3배,환사득이PEP위저물합성적3-탈양-α-아랍백경동당-7-린산(DAHP)산량제고도2.1배.2개기인천련표체비단개기인표체경유리우제고DAHP적산량。
