广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
1999年
5期
331-333
,共3页
顾琳%彭晓谋%邓练贤%谢冬英%陈青
顧琳%彭曉謀%鄧練賢%謝鼕英%陳青
고림%팽효모%산련현%사동영%진청
核糖核酸%逆转录-聚合酶链反应%方法学
覈糖覈痠%逆轉錄-聚閤酶鏈反應%方法學
핵당핵산%역전록-취합매련반응%방법학
目的探讨相对简便和不易污染的直接热变性处理血清样本进行RT-PCR检测的敏感性和重复性不理想的原因,并对其进行改良.方法对比分析直接热变性上清液中的pH值和蛋白抑制因子对RT-PCR体系的pH值和PCR扩增效果的影响.评价改良方法的性能.结果 10份正常血清直接热变性上清的pH值平均为8.96±1.34.与RT-PCR Ⅰ液和改良RT-PCR Ⅰ液混合后的pH值分别为8.55±0.53和8.32±0.07.直接热变性上清液对PCR的抑制作用达100～1 000倍.这种抑制作用可被加入300 μg/mL蛋白酶K消化而完全消除.消化热变性法的敏感性和重复性与传统的抽提法接近,且不易污染.结论 pH值波动和蛋白性抑制因子的存在是直接热变性法重复性和敏感性差的重要原因.消化热变性法不仅敏感性高,重复性能与抽提法相媲美,而且简便性和防污染能力更为优越.
目的探討相對簡便和不易汙染的直接熱變性處理血清樣本進行RT-PCR檢測的敏感性和重複性不理想的原因,併對其進行改良.方法對比分析直接熱變性上清液中的pH值和蛋白抑製因子對RT-PCR體繫的pH值和PCR擴增效果的影響.評價改良方法的性能.結果 10份正常血清直接熱變性上清的pH值平均為8.96±1.34.與RT-PCR Ⅰ液和改良RT-PCR Ⅰ液混閤後的pH值分彆為8.55±0.53和8.32±0.07.直接熱變性上清液對PCR的抑製作用達100～1 000倍.這種抑製作用可被加入300 μg/mL蛋白酶K消化而完全消除.消化熱變性法的敏感性和重複性與傳統的抽提法接近,且不易汙染.結論 pH值波動和蛋白性抑製因子的存在是直接熱變性法重複性和敏感性差的重要原因.消化熱變性法不僅敏感性高,重複性能與抽提法相媲美,而且簡便性和防汙染能力更為優越.
목적탐토상대간편화불역오염적직접열변성처리혈청양본진행RT-PCR검측적민감성화중복성불이상적원인,병대기진행개량.방법대비분석직접열변성상청액중적pH치화단백억제인자대RT-PCR체계적pH치화PCR확증효과적영향.평개개량방법적성능.결과 10빈정상혈청직접열변성상청적pH치평균위8.96±1.34.여RT-PCR Ⅰ액화개량RT-PCR Ⅰ액혼합후적pH치분별위8.55±0.53화8.32±0.07.직접열변성상청액대PCR적억제작용체100～1 000배.저충억제작용가피가입300 μg/mL단백매K소화이완전소제.소화열변성법적민감성화중복성여전통적추제법접근,차불역오염.결론 pH치파동화단백성억제인자적존재시직접열변성법중복성화민감성차적중요원인.소화열변성법불부민감성고,중복성능여추제법상비미,이차간편성화방오염능력경위우월.
