热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2007年
6期
575-577
,共3页
赵友云%高应林%王春香%乐惠荣
趙友雲%高應林%王春香%樂惠榮
조우운%고응림%왕춘향%악혜영
SYBR Green Ⅰ%TaqMan探针%定量PCR%HBV-DNA含量%Tm
SYBR Green Ⅰ%TaqMan探針%定量PCR%HBV-DNA含量%Tm
SYBR Green Ⅰ%TaqMan탐침%정량PCR%HBV-DNA함량%Tm
目的 探索SYBR Green Ⅰ联合TaqMan荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义.方法 选择浓度为108.48、105.70和103.70 copies/ml的3种HBV-DNA阳性血清和＜1×103.0 copies/ml的阴性血清各1份,在TaqManPCR混合反应体系中加入SYBR Green Ⅰ组成双荧光PCR(TaqMan+SYBR Green Ⅰ组),同时进行TaqMan和SYBR Green Ⅰ的单荧光PCR(分别为TaqMan组和SYBR Green I组),设置同一PCR和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其Tm,每种方法一次检测每份血清5次.结果 TaqMan+SYBR Green Ⅰ组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±0.32、105.79±0.29、103.810.30,与TaqMan组的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25 copies/ml 对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P＞0.05);与SYBR Green Ⅰ组的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26 copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P＜0.05).TaqMan+SYBR Green Ⅰ组和SYBR Green Ⅰ组阳性血清均出现明显熔解曲线,熔解温度(Tm)分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值.结论 SYBR Green Ⅰ联合TaqMan-PCR检测HBV-DNA时,具有能维持TaqMan-PCR的高灵敏度、特异性更强,并能同时检测HBV-DNA Tm的特点,为HBV的DNA多态性分析,尤其是在HBV基因分型方面提供了新的检测思路.
目的 探索SYBR Green Ⅰ聯閤TaqMan熒光定量PCR檢測HBV-DNA的意義.方法 選擇濃度為108.48、105.70和103.70 copies/ml的3種HBV-DNA暘性血清和＜1×103.0 copies/ml的陰性血清各1份,在TaqManPCR混閤反應體繫中加入SYBR Green Ⅰ組成雙熒光PCR(TaqMan+SYBR Green Ⅰ組),同時進行TaqMan和SYBR Green Ⅰ的單熒光PCR(分彆為TaqMan組和SYBR Green I組),設置同一PCR和鎔解麯線的循環參數,檢測HBV-DNA含量及其Tm,每種方法一次檢測每份血清5次.結果 TaqMan+SYBR Green Ⅰ組檢測的HBV-DNA暘性血清均為暘性,其平均含量為108.55±0.32、105.79±0.29、103.810.30,與TaqMan組的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25 copies/ml 對應濃度值取10對數比較,無統計學意義(t=0.31、0.54和0.27,P＞0.05);與SYBR Green Ⅰ組的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26 copies/ml(不含未檢齣的兩次血清)比較,除高濃度外,中低濃度有統計學意義(t=2.90和2.62,P＜0.05).TaqMan+SYBR Green Ⅰ組和SYBR Green Ⅰ組暘性血清均齣現明顯鎔解麯線,鎔解溫度(Tm)分彆為71.8℃、72℃和79.8℃,陰性血清未齣現擴增麯線和Tm值.結論 SYBR Green Ⅰ聯閤TaqMan-PCR檢測HBV-DNA時,具有能維持TaqMan-PCR的高靈敏度、特異性更彊,併能同時檢測HBV-DNA Tm的特點,為HBV的DNA多態性分析,尤其是在HBV基因分型方麵提供瞭新的檢測思路.
목적 탐색SYBR Green Ⅰ연합TaqMan형광정량PCR검측HBV-DNA적의의.방법 선택농도위108.48、105.70화103.70 copies/ml적3충HBV-DNA양성혈청화＜1×103.0 copies/ml적음성혈청각1빈,재TaqManPCR혼합반응체계중가입SYBR Green Ⅰ조성쌍형광PCR(TaqMan+SYBR Green Ⅰ조),동시진행TaqMan화SYBR Green Ⅰ적단형광PCR(분별위TaqMan조화SYBR Green I조),설치동일PCR화용해곡선적순배삼수,검측HBV-DNA함량급기Tm,매충방법일차검측매빈혈청5차.결과 TaqMan+SYBR Green Ⅰ조검측적HBV-DNA양성혈청균위양성,기평균함량위108.55±0.32、105.79±0.29、103.810.30,여TaqMan조적108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25 copies/ml 대응농도치취10대수비교,무통계학의의(t=0.31、0.54화0.27,P＞0.05);여SYBR Green Ⅰ조적108.41±0.35、105.21±0.34화103.26±0.26 copies/ml(불함미검출적량차혈청)비교,제고농도외,중저농도유통계학의의(t=2.90화2.62,P＜0.05).TaqMan+SYBR Green Ⅰ조화SYBR Green Ⅰ조양성혈청균출현명현용해곡선,용해온도(Tm)분별위71.8℃、72℃화79.8℃,음성혈청미출현확증곡선화Tm치.결론 SYBR Green Ⅰ연합TaqMan-PCR검측HBV-DNA시,구유능유지TaqMan-PCR적고령민도、특이성경강,병능동시검측HBV-DNA Tm적특점,위HBV적DNA다태성분석,우기시재HBV기인분형방면제공료신적검측사로.
