生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
7-9
,共3页
杨宇%黄芝英%刁梦雪%邱冠周
楊宇%黃芝英%刁夢雪%邱冠週
양우%황지영%조몽설%구관주
嗜酸氧化亚铁硫杆菌%启动子探针载体%β-半乳糖苷酶%定点突变
嗜痠氧化亞鐵硫桿菌%啟動子探針載體%β-半乳糖苷酶%定點突變
기산양화아철류간균%계동자탐침재체%β-반유당감매%정점돌변
目的:为了研究嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)启动子结构与功能.方法:以pSV-β-galactosidase质粒为骨架,通过定点突变的方法引入一个新的Bst B Ⅰ单酶切位点,构建能在大肠杆菌(Escherichia coli)中正常复制的启动子探针载体.利用PER的方法将A.grttoocifsnd菌cycA2基因上游5'段上游DNA片段克隆到探针载体β-半乳糖苷酶基因上游以替代其原有启动子(gpt启动子),并将重组的质粒转化E.coli DH5α菌株.通过检测宿主细胞的β-半乳糖苷酶活性,来鉴定启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度.结果:pSV-β-galactosidase质粒被正确突变,成功构建了启动子探针载体pSVB.来源于A.ferrooxidans菌的启动子片段可驱动β-半乳糖苷酶基因在E.coli细胞中表达,转化子酶活性约为gpt启动子驱动下活性的70%.结论:启动子探针载体(pSVB)可用于A.ferrooxidans菌或者其它原核生物启动子的分离及进一步的分析研究.酶活性分析结果表明,来源于A.ferrooxidans菌cycA2基因上游5'段上游DNA片段具有显著启动子活性.
目的:為瞭研究嗜痠氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)啟動子結構與功能.方法:以pSV-β-galactosidase質粒為骨架,通過定點突變的方法引入一箇新的Bst B Ⅰ單酶切位點,構建能在大腸桿菌(Escherichia coli)中正常複製的啟動子探針載體.利用PER的方法將A.grttoocifsnd菌cycA2基因上遊5'段上遊DNA片段剋隆到探針載體β-半乳糖苷酶基因上遊以替代其原有啟動子(gpt啟動子),併將重組的質粒轉化E.coli DH5α菌株.通過檢測宿主細胞的β-半乳糖苷酶活性,來鑒定啟動子片段,併分析瞭啟動子探針質粒載體的功能及啟動子的彊度.結果:pSV-β-galactosidase質粒被正確突變,成功構建瞭啟動子探針載體pSVB.來源于A.ferrooxidans菌的啟動子片段可驅動β-半乳糖苷酶基因在E.coli細胞中錶達,轉化子酶活性約為gpt啟動子驅動下活性的70%.結論:啟動子探針載體(pSVB)可用于A.ferrooxidans菌或者其它原覈生物啟動子的分離及進一步的分析研究.酶活性分析結果錶明,來源于A.ferrooxidans菌cycA2基因上遊5'段上遊DNA片段具有顯著啟動子活性.
목적:위료연구기산양화아철류간균(Acidithiobacillus ferrooxidans)계동자결구여공능.방법:이pSV-β-galactosidase질립위골가,통과정점돌변적방법인입일개신적Bst B Ⅰ단매절위점,구건능재대장간균(Escherichia coli)중정상복제적계동자탐침재체.이용PER적방법장A.grttoocifsnd균cycA2기인상유5'단상유DNA편단극륭도탐침재체β-반유당감매기인상유이체대기원유계동자(gpt계동자),병장중조적질립전화E.coli DH5α균주.통과검측숙주세포적β-반유당감매활성,래감정계동자편단,병분석료계동자탐침질립재체적공능급계동자적강도.결과:pSV-β-galactosidase질립피정학돌변,성공구건료계동자탐침재체pSVB.래원우A.ferrooxidans균적계동자편단가구동β-반유당감매기인재E.coli세포중표체,전화자매활성약위gpt계동자구동하활성적70%.결론:계동자탐침재체(pSVB)가용우A.ferrooxidans균혹자기타원핵생물계동자적분리급진일보적분석연구.매활성분석결과표명,래원우A.ferrooxidans균cycA2기인상유5'단상유DNA편단구유현저계동자활성.
