CAJ | 학술논문

背景:肌动蛋白和Tau蛋白分别是微丝和微管的重要组成成分,肌动蛋白和Tau蛋白的分布能否作为微丝和微管的观察指标.目的:构建肌动蛋白和Tau蛋白的红色和绿色荧光蛋白融合表达载体并转染真核细胞,观察其在细胞内的表达和定位情况.设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2008-03/08在南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室共同完成.材料:克隆在pcDNA3载体上的肌动蛋白和Tau蛋白真核表达载体pcDNA3-actin和pcDNA3-Tau,以及红色荧光蛋白表达载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2、大肠杆菌株DH5α和小鼠NIH3T3细胞系由南方医科大学病理生理学教研室保存.方法:将克隆在pcDNA3上的肌动蛋白和Tau蛋白亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,然后转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察重组载体的表达和细胞内定他.主要观察指标:NIH3T3细胞转染24h后.利用Leica荧光显微镜观察上述重组载体在细胞中的表达和定位情况.结果:重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在NIH3T3细胞中可获得高量表达.融合蛋白发出的红色和绿色荧光均表明,肌动蛋白在细胞质中呈短丝状弥散分布,Tau蛋白以细胞核为中心呈放射状排列.结论:成功构建了肌动蛋白和Tau蛋白的不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,这为研究细胞骨架在信号分子移位中的作用提供了一个重要的工具.
배경:기동단백화Tau단백분별시미사화미관적중요조성성분,기동단백화Tau단백적분포능부작위미사화미관적관찰지표.목적:구건기동단백화Tau단백적홍색화록색형광단백융합표체재체병전염진핵세포,관찰기재세포내적표체화정위정황.설계、시간급지점:단일양본관찰실험,우2008-03/08재남방의과대학병리생이학교연실화광동성단백질조학중점실험실공동완성.재료:극륭재pcDNA3재체상적기동단백화Tau단백진핵표체재체pcDNA3-actin화pcDNA3-Tau,이급홍색형광단백표체재체pmCherry-C2화록색형광단백표체재체pEGFP-C2、대장간균주DH5α화소서NIH3T3세포계유남방의과대학병리생이학교연실보존.방법:장극륭재pcDNA3상적기동단백화Tau단백아극륭도홍색형광단백재체pmCherry-C2화록색형광단백재체pEGFP-C2상,연후전염NIH3T3세포,이용형광현미경관찰중조재체적표체화세포내정타.주요관찰지표:NIH3T3세포전염24h후.이용Leica형광현미경관찰상술중조재체재세포중적표체화정위정황.결과:중조질립경매절、PCR화측서감정정학무오,병재NIH3T3세포중가획득고량표체.융합단백발출적홍색화록색형광균표명,기동단백재세포질중정단사상미산분포,Tau단백이세포핵위중심정방사상배렬.결론:성공구건료기동단백화Tau단백적불동형광단백융합표체재체,병재진핵세포중득도유효표체,저위연구세포골가재신호분자이위중적작용제공료일개중요적공구.