细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2002年
1期
30-32
,共3页
H-2Kb%基因表达%纯化%复性
H-2Kb%基因錶達%純化%複性
H-2Kb%기인표체%순화%복성
目的构建可生物素化H-2Kb-BSP 融合基因的表达载体.方法采用PCR技术,从pBluescript(+)-Kb中扩增出H-2Kb基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列后,克隆入pET-42b(+)高效表达载体进行诱导表达.并对表达产物进行纯化与复性.结果成功地构建了融合表达载体pET-H 2Kb-BSP,对表达产物进行纯化与复性,并应用仅识别完整构象的抗Kb分子的单克隆抗体对复性后产物进行了检测.证明表达产物已部分恢复了构象.结论获得H-2Kb-BSP融合蛋白的高效表达,为研究在原核系统中表达、纯化与复性,以及进一步利用亲和素在体外构建MHC-I类分子四聚体,探讨免疫识别机制奠定了基础.
目的構建可生物素化H-2Kb-BSP 融閤基因的錶達載體.方法採用PCR技術,從pBluescript(+)-Kb中擴增齣H-2Kb基因的胞外區,拼接上依賴BirA酶的可生物素化序列後,剋隆入pET-42b(+)高效錶達載體進行誘導錶達.併對錶達產物進行純化與複性.結果成功地構建瞭融閤錶達載體pET-H 2Kb-BSP,對錶達產物進行純化與複性,併應用僅識彆完整構象的抗Kb分子的單剋隆抗體對複性後產物進行瞭檢測.證明錶達產物已部分恢複瞭構象.結論穫得H-2Kb-BSP融閤蛋白的高效錶達,為研究在原覈繫統中錶達、純化與複性,以及進一步利用親和素在體外構建MHC-I類分子四聚體,探討免疫識彆機製奠定瞭基礎.
목적구건가생물소화H-2Kb-BSP 융합기인적표체재체.방법채용PCR기술,종pBluescript(+)-Kb중확증출H-2Kb기인적포외구,병접상의뢰BirA매적가생물소화서렬후,극륭입pET-42b(+)고효표체재체진행유도표체.병대표체산물진행순화여복성.결과성공지구건료융합표체재체pET-H 2Kb-BSP,대표체산물진행순화여복성,병응용부식별완정구상적항Kb분자적단극륭항체대복성후산물진행료검측.증명표체산물이부분회복료구상.결론획득H-2Kb-BSP융합단백적고효표체,위연구재원핵계통중표체、순화여복성,이급진일보이용친화소재체외구건MHC-I류분자사취체,탐토면역식별궤제전정료기출.
