CAJ | 학술논문

根据已发表的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)外膜蛋白OmpU的基因序列设计1对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,自哈维氏弧菌致病菌株基因组中扩增获得一段约1 000 bp的序列,构建重组载体pMD18-T-OmpU;测序结果表明,该基因与已发表的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU序列存在98%以上的相似性,该序列在GenBank上的登录号为FJ919231.构建表达质粒pET-30a(+)-OmpU后转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下实现高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约为41 ku,与预期基本相符.重组蛋白以包涵体形式表达.以脲素法得到初步纯化的重组蛋白,以50 μg/mL的剂量注射免疫大黄鱼幼鱼,经间接ELISA法检测了4~8周后特异性抗体的效价,同时检测了注射后4周的免疫保护率.结果表明,4~8周内特异性抗体效价持续升高,达到log2 8.0以上,4周时的相对免疫保护率为85%.试验结果显示了重组哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU具有良好的免疫原性,可作为亚单位疫苗的开发对象.
근거이발표적합유씨호균(Vibrio harveyi)외막단백OmpU적기인서렬설계1대특이성인물,응용취합매련식반응(PCR)방법,자합유씨호균치병균주기인조중확증획득일단약1 000 bp적서렬,구건중조재체pMD18-T-OmpU;측서결과표명,해기인여이발표적합유씨호균외막단백OmpU서렬존재98%이상적상사성,해서렬재GenBank상적등록호위FJ919231.구건표체질립pET-30a(+)-OmpU후전화지대장간균E.coli BL21(DE3),재IPTG유도하실현고효표체,SDS-PAGE현시중조단백분자질량약위41 ku,여예기기본상부.중조단백이포함체형식표체.이뇨소법득도초보순화적중조단백,이50 μg/mL적제량주사면역대황어유어,경간접ELISA법검측료4~8주후특이성항체적효개,동시검측료주사후4주적면역보호솔.결과표명,4~8주내특이성항체효개지속승고,체도log2 8.0이상,4주시적상대면역보호솔위85%.시험결과현시료중조합유씨호균외막단백OmpU구유량호적면역원성,가작위아단위역묘적개발대상.